中药蓝玉簪龙胆灯台抗病毒实验研究

摘要

目的：
　　1.研究蓝玉簪龙胆，灯台两种中药对呼吸道合胞病毒株（RSV-LONG株）感染人喉癌（Hep-2）细胞引起的细胞病变（CPE）的作用，分析其可能的抗RSV机制。
　　2.研究蓝玉簪龙胆，灯台两种中药对RSV引起的小鼠肺部感染的治疗效果，分析其可能的抗炎、抗病毒作用。
　　方法：
　　1.体外细胞实验：以Hep-2为宿主细胞，通过光镜下观察CPE法和四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法，测定蓝玉簪龙胆，灯台对Hep-2细胞的毒性作用；检测二种中药不同浓度下对RSV直接杀伤作用、病变抑制作用以及阻断作用，确认药物的有效作用方式，同时设空白对照组及病毒对照组。
　　2.体内动物实验：通过对昆明种小鼠清醒状态下滴鼻感染，建立RSV感染小鼠模型；分别给与蓝玉簪龙胆水煎液、灯台水煎液灌胃治疗，每天一次，疗程7天。于最后一次给药12小时后处死小鼠，取出肺组织进行切片HE染色和RSV直接免疫荧光染色，观察建模成功的小鼠病毒性肺炎进展程度以及它们对病毒性肺炎的治疗情况。同时设空白对照组及病毒对照组。
　　结果：
　　1.蓝玉簪龙胆细胞实验，各类药物无毒浓度界值分别为：蓝玉簪龙胆水煎液（6.25mg/ml）、正丁醇提取液(1700mg/ml)、乙酸乙酯提取液(19.1mg/ml)、氯仿提取液(7.5mg/ml)，灯台水煎液（12.5mg/ml）。细胞实验显示：与病毒对照组相比，蓝玉簪龙胆水煎液、蓝玉簪正丁醇、乙酸乙酯、氯仿提取液在各自无毒浓度稀释32倍以内均具有抑制RSV病变效果，且呈剂量依赖关系。蓝玉簪各提取液不同稀释倍数在直接杀伤及阻断入侵两方面效果不明确。
　　2.蓝玉簪龙胆动物实验：小鼠肺组织病理切片HE染色显示：空白对照组小鼠绝大部分肺泡无炎性积液浸润，肺泡间隔不宽、无充血、水肿，无炎性细胞浸润。病毒对照组可见明显的间质性肺炎病变，表现为支气管、细支气管壁、肺泡壁及肺间质充血、水肿，并伴有大量淋巴细胞和单核细胞浸润；肺泡内大量炎性浆液渗出，蓝玉簪水煎液治疗组肺泡内炎性浆液渗出及炎性细胞浸润明显改善。肺间质充血、水肿明显减轻，其内淋巴细胞及单核细胞浸润明显较少。直接免疫荧光染色显示：对照组可见肺组织肺泡上皮内存在明亮的荧光颗粒，空白组可见可疑的非特异染色荧光存在，蓝玉簪水煎液组可见RSV颗粒数量及亮度均明显下降，呈微弱的可疑荧光。
　　3.灯台细胞实验：灯台水煎液在无毒浓度稀释32倍以下在病变抑制、直接杀伤、阻断入侵三种方式上均具有一定抗RSV作用。
　　4.灯台动物实验：小鼠肺组织病理切片HE染色显示：空白对照组小鼠肺泡内无炎性浆液浸润，肺泡间隔不宽，无充血、水肿，其内未见炎性细胞浸润。病毒对照组可观察到大量肺泡内炎性浆液渗出，肺泡间隔明显增宽、水肿、其内大量炎性细胞浸润。灯台治疗组可见炎性浆液渗出已大大减轻，肺泡间隔不宽，其内未见明显炎性细胞浸润。直接免疫荧光显示，空白对照组无特异性荧光颗粒，病毒对照组内可见大量荧光颗粒分布在肺泡上皮。灯台治疗组相比对照组，荧光的亮度及颗粒数量均大大降低，呈可疑荧光。证实了灯台可以抑制RSV在小鼠肺组织内继续增殖。
　　结论：
　　1.蓝玉簪龙胆水煎液、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇等四种提取液在体外Hep-2宿主细胞上具有一定抑制RSV引起的病变作用，在直接杀伤及阻断入侵两方面未见作用。灯台水煎液在对RSV的病变抑制、直接杀伤、阻断入侵三方面均具有一定作用。
　　2.蓝玉簪龙胆水煎液、灯台水煎液可明显改善RSV引起的小鼠肺部感染。

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文献回顾

一、西医抗呼吸道合胞病毒（RSV）药物研究进展

二、中药抗呼吸道合胞病毒研究进展

三、龙胆类药物研究进展

三、灯台树研究进展

正文

第一部分 细胞试验

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

第二部分 蓝玉簪、灯台对 RSV 感染小鼠后肺部炎症的治疗效果

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历及研究成果

致谢