九节龙皂苷Ⅰ诱导口腔粘液表皮样癌高转移细胞株Mc3凋亡作用的研究

摘要

目的：
　　研究九节龙皂苷Ⅰ(ardipusilloside I,ADS I)对口腔粘液表皮样癌高转移细胞株Mc3的增殖、凋亡及细胞周期的影响,初步探讨ADSI可能的抗肿瘤作用机制。
　　方法：
　　以不同浓度的ADSI作用于口腔粘液表皮样癌Mc3细胞，采用MTT法观察ADSI对口腔粘液表皮样癌Mc3细胞增殖的影响；采用Hoechest33342染色法和透射电镜（TEM）观察细胞形态学的变化；采用AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况；采用流式细胞术PI单色标记法检测Mc3细胞周期的改变；采用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡特异性梯状DNA；采用免疫组化法检测抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白caspase-3表达的变化。
　　结果：
　　ADSI作用于Mc3细胞后,小剂量对细胞杀伤作用较轻,随着药物浓度的增加,ADSI能显著抑制Mc3细胞增殖而且呈明显的浓度、时间依赖关系，作用于Mc3细胞48h的IC50值为9.98ug/ml。Hoechest33342染色法和透射电镜观察到细胞形态学上的变化，包括细胞皱缩，微绒毛消失，染色质固缩集聚至核膜周边呈新月形。流式细胞仪检测未经药物作用的细胞凋亡率为11.63±0.16％，2.5、5、10ug/mlADSI作用24后的凋亡率为15.57±0.07％，25.63±0.18％，86.27±0.04％；细胞周期阻滞在S期；琼脂糖凝胶电泳结果显示，10ug/mlADSI作用于Mc3细胞24后，可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带，Western blotting结果显示，caspase-3和Bax蛋白表达量增高，Bcl-2蛋白表达量降低。
　　结论：
　　1.ADSI具有抑制口腔粘液表皮癌细胞增殖，阻滞细胞周期进程的作用，其抑制作用呈浓度时间依赖性。
　　2.ADSI有诱导Mc3细胞凋亡作用。
　　3.ADSI诱导细胞凋亡作用可能是通过引起细胞DNA受损，上调caspase-3和Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达而达到的。

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缩略语表

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前言

文献回顾

第一部分：口腔粘液表皮样癌的研究概况

第二部分 九节龙研究近况

第三部分 细胞凋亡与肿瘤

正文

实验一 九节龙皂苷Ⅰ对 Mc3 细胞增殖及细胞周期的影响

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

实验二 九节龙皂苷Ⅰ诱导 Mc3 细胞凋亡及其机制的研究

1 材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢