siRNA下调MTDH基因表达抑制乳腺癌细胞恶性生物学行为的研究

摘要

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，也是导致女性癌症死亡的首要原因。越来越多的研究表明，乳腺癌具有高度异质性，不同分子表型的乳腺癌对特定治疗具有不同的反应，在疾病转归和预后上也存在很大差异。其中人表皮生长因子受体-2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2,HER2)过表达型和受体三阴性乳腺癌(triplenegativebreastcancer,TNBC)容易出现复发、转移和耐药，预后相对较差。对此类预后不良的乳腺癌，除对现有治疗进行优化外，亟需探索新的分子靶点。
　　MTDH即转移粘附基因/蛋白（metadherin,MTDH），又称作星形胶质细胞上调基因-1（astrocyteelevatedgene-1,AEG-1），是一个与肿瘤发生、发展密切相关的癌基因。MTDH参与多条信号通路的激活，可以使正常细胞发生恶性转化，在肿瘤的无限增殖、逃避凋亡、侵袭转移、血管生成和化疗耐药等恶性表型中发挥重要作用。近来研究发现，MTDH在乳腺癌组织中高表达，且与不良预后密切相关。因此探索MTDH在乳腺癌细胞恶性生物学行为中发挥的作用以及将MTDH作为乳腺癌治疗的潜在靶点具有重要意义。
　　本研究采用HER2过表达（SK-BR-3）和受体三阴性(MDA-MB-453)乳腺癌细胞系，通过小干扰RNA技术(smallinterferingRNA,siRNA)下调MTDH的表达，观察其对乳腺癌细胞增殖、凋亡、粘附、侵袭等生物学行为的影响，以期为将MTDH作为预后不良型乳腺癌的潜在治疗靶点提供理论和实验依据。
　　第一部分
　　MTDH表达下调对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、周期和凋亡的影响
　　目的：探讨MTDH基因表达下调对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、周期和凋亡的影响。
　　方法：采用siRNA技术，下调乳腺癌SK-BR-3细胞MTDH基因的表达，反转录PCR和免疫细胞化学实验检测干扰效果。MTT实验检测MTDH基因下调对SK-BR-3细胞增殖的影响，流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。
　　结果：MTDH基因表达下调后，乳腺癌SK-BR-3细胞增殖能力减弱，细胞阻滞于G0/G1期，S期和G2/M期细胞比例下降，细胞凋亡增加。
　　结论：MTDH基因表达下调可抑制SK-BR-3细胞增殖，阻滞其于G0/G1期，并诱导细胞凋亡。
　　第二部分
　　MTDH表达下调对乳腺癌MDA-MB-453细胞粘附、迁移和侵袭的影响目的：探讨MTDH基因表达下调对MDA-MB-453细胞粘附、迁移和侵袭的影响。
　　方法：采用siRNA技术，下调乳腺癌MDA-MB-453细胞MTDH的表达，反转录PCR和免疫细胞化学技术检测MTDH的RNA和蛋白质水平，验证干扰效果。通过细胞粘附实验、迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测MTDH基因下调后细胞粘附、迁移和侵袭能力的变化。
　　结果：MTDH表达下调后，细胞粘附力下降，30min和60min粘附率较对照组分别降低42.0％和49.7％；细胞迁移能力显著降低，迁移率下降33.3％；细胞侵袭力受到抑制，下降达46.3％。
　　结论：下调MTDH基因表达可明显抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞的粘附、迁移和侵袭能力。

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缩略语表

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前 言

文献回顾

1 MTDH 的分子克隆、结构与定位

2 MTDH 在恶性肿瘤中的表达及意义

3 MTDH 与肿瘤的恶性生物学行为

4 MTDH 参与的肿瘤细胞信号转导通路

5 MTDH 的临床转化前景

正 文

第一部分MTDH 表达下调对乳腺癌 SK-BR-3 细胞增殖、周期和凋亡的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分MTDH 表达下调对乳腺癌 MDA-MB-453细胞粘附、迁移和侵袭的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小 结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢