我国部分地区BVDV的分子流行病学调查和一株BVDV的全基因测序分析

摘要

牛病毒性腹泻/黏膜病毒(Bovine viral diarrhea virus-mucosal disease virus，BVDV/MDV)属黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)，为单股正链RNA病毒，基因组全长约12～13kb，能侵害牛、猪、鹿、牦牛等动物，引起腹泻、白细胞减少、黏膜糜烂溃疡、繁殖障碍等临床症状。 本试验共分为三部分，第一部分是我国部分地区BVDV分子流行病学调查与分析。从山西、山东、河南、北京、天津、甘肃等地奶牛场采样，检测BVDV，扩增BVDV阳性样品5'UTR序列制作进化树，进行遗传进化分析，确定我国这些地区奶牛场BVDV的流行的基因型和亚型，分析我国这些地区BVDV的流行情况，为BVDV的研究提供依据。 第二部分是一株BVDV的全基因测序分析。从天津某奶牛场分离到一株BVDV，该分离株与GenBnk上公布的猪源ZM-95株同源性最高。我们利用RT-PCR分段扩增、测序和拼接的方法，得到该病毒全基因序列。其全基因分析得出:基因组全长12199bp，其中5'-UTR长为330bp，ORF长为11697bp，3'-UTR为181bp。 第三部分是两个奶牛场BVDV持续性感染牛(PI)净化的第二轮净化检测，是继去年对山西和河南某奶牛场进行第一轮检测、淘汰PI牛后，本文对上述两牛场进行了第二轮检测净化。采用混样RT-PCR的方法检测奶牛场720份奶牛样品，并用商品化ELISA抗原检测试剂盒对其中212份样品重复检测验证。试验结果显示:两种方法均未检测出PI牛，表明上述奶牛场的BVDV净化工作完成，并证明混样RT-PCR方法准确可靠，为其他奶牛场BVDV净化提供了借鉴。

目录

声明

摘要

文献综述

1 BVDV生物学研究进展

1．1 BVDV的生物学特性

1．2 BVDV的流行病学特征

1．3 BVD的临床表现及致病机理

2 BVDV检测方法的研究进展

2．1 病毒分离鉴定

2．2 电镜观察

2．3 血清学诊断方法

2．4 分子生物学实验技术

3 BVDV分子生物学研究进展

3．1 5’-UTR

3．2 3’-UTR

3．3 开放阅读框架(ORF)

4 结语

试验一 我国部分地区BVDV分子流行病学调查和遗传进化分析

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

试验二 一株BVDV的全基因测序与分析

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

试验三 奶牛场PI牛净化工作的检测

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

4 小结

全文总结

参考文献

缩略词和符号说明

致谢