H5亚型禽流感病原变异、预防和治疗三项调查研究

摘要

自1996年中国在禽群中分离到H5亚型高致病性禽流感病毒以来，中国每年都有这一病毒引发禽类疫情或人感染的报道。防控该病毒引发的动物疫情和对人的威胁是近年来中国兽医工作的重点之一。本课题针对H5亚型高致病性禽流感病毒展开了病原变异、预防和治疗等方面3项调查研究。 一、病原变异调查。2013年3-4月，在全国19个省、自治区开展了H5亚型高致病性禽流感流行病学调查，共采集和检测咽喉、泄殖腔棉拭子7371份，粪便572份。对检测的阳性样品进行基因测序，结合样品的背景材料和既往的毒株信息进行进化和变异分析，得出以下结论:①H5亚型高致病性禽流感病毒污染面较广，污染程度较深，活禽市场中尤为严重;②2013年3-4月我国H5亚型AIV主要存在第2.3.4、第2.3.2和第7分支，其中第2.3.2.1分支为最主要的流行谱系;③第2.3.4分支发现了H5N2亚型强毒株;④此次检出的第7分支病毒，相对于它对应的Re-4疫苗毒出现了显著差异。 二、合成肽疫苗载体研究。人工合成带有生物素标记的禽流感病毒两条多肽，将它们与亲和素结合，形成亲和素-生物素-合成肽连接物，然后免疫小鼠。抗体检测结果表明这些连接物能够诱导抗亲和素抗体的产生，但不能诱导抗合成肽抗体的产生，提示亲和素借助于它与生物素的特异性结合的特性，不能成为合成肽疫苗的理想载体。本研究为开展合成肽疫苗和体液免疫反应机制等方面研究，提供参考。 三、治疗禽流感病毒感染的动物试验。以氟伐他汀作为他汀类药物的代表，用H5亚型高致病性禽流感病毒对四组无特定病原体的鸡进行攻毒，然后每天分别进行灌注含抗菌素的营养液、含1/10倍氟伐他汀和抗菌素的营养液、含1倍氟伐他汀和抗菌素的营养液、普通饮用水（阴性对照），观察各组发病率和死亡率。结果表明，氟伐他汀没有明显降低鸡的发病率和死亡率，从而不支持前人关于他汀类药物对流感大流行人间病例有疗效的推测。该试验为人间流感大流行爆发后，人间病例的治疗方案提供参考。

目录

声明

摘要

前言

1 禽流感病毒的研究进展

1．1 禽流感概述

1．2 AIV的基本特征

1．3 AIV遗传变异特点

1．4 AIV的流行病学特征

2 禽流感疫苗的研究进展

2．1 全病毒灭活疫苗

2．2 亚单位疫苗

2．3 重组活载体疫苗

2．4 核酸疫苗

2．5 合成肽疫苗

3 H5亚型高致病性禽流感病毒

3．1 人感染H5亚型病毒的现状

3．2 人感染H5亚型HPAIV的宿主屏障

3．3 近年来H5亚型HPAI的国内外流行特征

3．4 H5亚型AIV的谱系分布

4 合成肽疫苗

4．1 合成肽疫苗的研究进展

4．2 合成肽疫苗的构建

4．3 合成肽疫苗载体

4．4 亲和素-生物素

5 他汀类药物对感染性肺炎的辅助治疗

5．1 他汀类药物的生物活性

5．2 他汀类药物的生物多效活性

5．3 人流感病毒

5．4 他汀类药物对流感治疗作用的研究进展

6 实验目的和意义

试验一 2013年上半年H5亚型HPAIV的HA基因分子进化分析

1 材料与方法

1．1 主要试剂和仪器

1．2 主要溶液的配置

1．3 样品的采集

1．4 病毒的扩增

1．5 病毒核酸的提取

1．6 HA基因引物的设计

1．7 一步法RT-PCR扩增HA和NA基因

1．8 RT-PCR产物实时毛细管电泳

1．9 基因序列测定及分析

1．10 分离毒株的分子进化分析

2 结果与分析

2．1 结果

2．2 讨论分析

3 讨论

3．1 AIV分子学检测

3．2 H5强毒分布情况

3．3 近年来我国H5强毒变异情况分析

3．4 病毒变异导致H5免疫越发困难

3．5 H5亚型AIV的防控策略

4 小结

试验二 亲和素作为合成肽疫苗载体的试验研究

1 材料与方法

1．1 主要试剂和仪器

1．2 主要溶液的配制

1．3 多肽的合成

1．4 合成肽与亲和素的连接

1．5 免疫抗原的制备

1．6 小鼠免疫

1．7 血清样品的采集

1．8 ELISA抗体检测

2 结果与分析

2．1 结果

2．2 分析

3 讨论

3．1 H5亚型禽流感病毒疫苗的更替

3．2 抗体的产生

3．3 亲和素-生物素作为合成肽载体失败原因分析

4 小结

试验三 氟伐他汀对流感辅助治疗作用的试验研究

1 材料与方法

1．1 主要试剂与仪器

1．2 主要溶液的配置

1．3 SPF鸡攻毒、给药

2 试验结果与分析

2．1 试验结果

2．2 分析

3 讨论

4 小结

全文总结

参考文献

英文缩写词表

致谢