钙周期素结合蛋白在创伤性脑损伤中的表达及意义

摘要

目的：运用头颅瞬间侧向旋转致伤装置制作创伤性脑损伤（traumaticbraininjury,TBI）的大鼠模型，探讨创伤性脑损伤后海马钙周期素结合蛋白(calcyclinbindingprotein,CacyBP)在不同损伤时间点的表达变化规律，以及CacyBP与大鼠学习记忆功能的关系，旨在深入认识TBI的神经元退变机制，以期为临床诊治提供有价值的实验依据。
　　方法：健康雄性SD大鼠，清洁级，体重（200～225g），总计120只。随机选取60只大鼠，按随机数字表分为正常对照组（10只）和TBI组（50只）；运用头颅瞬间侧向旋转致伤装置制作大鼠TBI模型，并按伤后大鼠处死时间分为6h、24h、72h、7d、14d共5个亚组（每组10只）。采用免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）及蛋白印迹（westernblotting）方法检测CacyBP在大鼠海马区的分布情况及其在脑损伤后的表达变化规律。另取60只大鼠进行随机化分组：对照组（10只）和损伤组（50只），各损伤时间点每组10只。采用头颅瞬间侧向旋转致伤装置制作大鼠TBI模型，首先制作14d组大鼠TBI模型，一周后制作7d组，其后依次制作72h组、24h组、6h组模型，6h组模型制作完成后，即开始进行Morris水迷宫检测。通过Morris水迷宫实验检测各损伤时间点大鼠寻找并爬上隐藏平台的时间（逃避潜伏期，escapelatency）及原有平台停留时间（stay-timeatthein-waterplate），分析创伤性脑损伤后大鼠空间学习记忆功能的变化规律。实验中所得数据均以均数±标准差（x±SD）表示，应用社会科学统计软件包（StatisticalPackagefortheSocialSciences,SPSS)14.0软件进行t检验和方差分析，差异显著性水平定为p<0.05。
　　结果：大鼠脑组织中CacyBP主要分布在海马、齿状回及皮层下神经元的胞浆中。正常对照组的CacyBP显示高表达，TBI后6h组表达量明显减少，为最低值（p<0.05），随后各时间点表达量逐渐增加，至损伤后14d，CacyBP表达量逐渐接近正常组，与正常对照组差异比较无统计学意义（p>0.05）。Morris水迷宫结果提示:大鼠创伤性脑损伤后存在明显的空间学习记忆功能障碍，6h组逃避潜伏期较对照组明显延长（p<0.05），而6h组原有平台停留时间较对照组明显缩短（p<0.05），其后各损伤时间组与对照组差异逐渐缩小，至伤后14d，TBI大鼠与对照组比较无统计学差异（p>0.05）。
　　结论：创伤性脑损伤后早期（6h），大鼠海马出现CacyBP表达量明显下降，随存活期延长CacyBP表达量逐渐升高，至损伤后14d，CacyBP表达量逐渐恢复对照组水平。CacyBP先下降后逐渐升高恢复正常的表达趋势，与大鼠TBI后学习记忆严重障碍到逐渐恢复的变化趋势相一致，高度提示两者之间存在一定联系；据此推测，CacyBP可能是创伤性脑损伤后影响神经元退变及认知功能改变的关键分子之一。

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缩略语表

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前言

文献回顾

一、CacyBP 的发现与定位

二、CacyBP 与 S100 家族的相互作用

三、CacyBP 是 β-catenin 泛素化降解连接酶的组成部分

四、CacyBP 与细胞骨架

正文

实验一 创伤性脑损伤后大鼠海马钙周期素结合蛋白的表达变化

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 创伤性脑损伤后大鼠学习记忆功能的改变

1 材料

2 方法

3. 结果

4. 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢