VCL、FAK在应激性溃疡中表达的意义及止血胶对应激性溃疡预防作用的研究

摘要

现代社会,随着生活的压力日益增加及抢险救灾等非战斗军事应急任务的增多,地方和军队面临的应激相关疾病也日益增多。其中,应激性溃疡表现最为明显,严重影响人们的生活质量及部队的战斗力。已有研究表明,应激性溃疡的发生是多种因素综合作用的结果,包括神经内分泌的调节失控、粘膜损伤因素(如胃酸、胃蛋白酶、胆汁)的相对增强及胃粘膜防御屏障作用的减弱等。胃粘膜屏障中上皮细胞及紧密连接尤为重要,但是近年来研究发现,黏附连接相关蛋白纽蛋白(Vinculin,VCL)和粘着斑激酶(Focaladhensionkinase,FAK)在细胞-细胞间及细胞-细胞外基质连接中有要作用,并且通过复杂的信号传导通路调节上皮细胞迁移、增殖、凋亡等,然而黏附连接在应激性溃疡发病中及粘膜损伤后修复中的作用研究尚属空白。我科既往研制的主要用于治疗消化道出血的中药复合制剂--止血胶,其主要成分为白芨和阿胶,既有止血作用,又能粘附于糜烂及出血部位,对消化道出血具有显著疗效。因此,研究黏附连接及相关蛋白在应激性溃疡发病中的作用以及止血胶对应激性溃疡的预防作用,对于研究应激性溃疡的发生机制及对应激性溃疡的防治具有极其重要的意义。
　　目的
　　1.构建大鼠应激性溃疡模型,通过大体标本观察、溃疡指数计算以及检测大鼠血清表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor,EGF)、白细胞介素2(Interleukin2,IL-2),血小板活化因子(Plateletactivatingfactor,PAF)水平,证实小平台-水环境法能够成功构建大鼠应激性溃疡模型,并且探明应激相关细胞因子在小平台-水环境法构建的应激性溃疡中的变化情况;
　　2.通过对标本行黏附连接相关蛋白VCL、FAK免疫荧光染色,观察应激性溃疡发病中VCL、FAK表达变化情况,分析VCL、FAK表达变化与应激性溃疡的相关性;
　　3.给予大鼠止血胶灌胃,观察大鼠胃粘膜溃疡指数、血清EGF、IL-2、PAF水平及胃粘膜VCL、FAK变化情况,进一步探讨黏附连接在应激应激性溃疡发病中的作用以及止血胶对应激性溃疡的预防作用。
　　方法
　　依据睡眠剥夺原理,采用小平台-水环境法构建大鼠应激性溃疡模型,通过大体标本观察、溃疡指数计算、常规胃粘膜组织HE染色及ELISA法测大鼠血清EGF、IL-2、PAF水平证明模型构建成功;运用免疫荧光化学法检测大鼠胃粘膜组织中VCL、FAK的表达情况;通过预先给予大鼠止血胶灌胃,观察止血胶对大鼠应激性溃疡的预防作用。
　　结果
　　1.各应激组大鼠胃粘膜不同程度糜烂、溃疡、出血,尤其是应激5天及7天组,糜烂融合成片并有多处陈旧性血痂覆盖;各应激组大鼠的溃疡指数均较正常对照组明显增加(P<0.05);EGF、IL-2水平随应激程度加重而下降(P<0.05),PAF水平随应激程度加重而升高(P<0.05)。
　　2.随着应激时间延长及胃粘膜损伤程度加重,胃黏膜VCL的表达呈现下降趋势,VCL荧光光度值与溃疡指数存在负相关,r=-0.839,(P<0.01);FAK表达也呈下降趋势,FAK荧光光度值与溃疡指数存在负相关,r=-0.811,(P<0.01)。
　　3.给予大鼠止血胶灌胃,止血胶组胃粘膜溃疡指数较单纯应激组明显下降(P<0.01),EGF、IL-2较单纯应激组升高(P<0.05),而PAF较单纯应激组下降(P<0.05);VCL、FAK表达水平较单纯应激组升高(P<0.05)。
　　结论
　　小平台-水环境法可成功构建大鼠应激性溃疡模型;黏附连接相关蛋白VCL、FAK在应激性溃疡的发生中表达下降,由此推论黏附连接与应激性溃疡的发生有关;止血胶对于大鼠应激性溃疡的发生有一定的预防作用。

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英文摘要

文 献 回 顾

1 应激性溃疡的发病机制

2．粘着斑及相关蛋白

3 止血胶对消化道损伤中的作用

正文

实验一 应激性溃疡大鼠模型的制作及筛选

1 材料

2 方法

3 结果

3 讨论

实验二 FAK、VCL 在睡眠剥夺引起的应激性溃疡中的表达及意义

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验三 止血胶对应激性溃疡的防护作用研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢