花青素类提取物对大鼠视网膜光损伤的保护作用

摘要

视网膜是感受和传递视觉信息的起始部位,也是体内代谢最旺盛的组织之一,容易受到强光的影响而造成视觉功能障碍(如暗适应功能)、光诱导视网膜损伤等。因此对视网膜光损伤的防护具有重要的军事价值和临床意义。花青素是一类广泛存在于多种天然植物中的多酚类化合物,其在抗辐射损伤、抗氧化损伤、抗疲劳、抗衰老等方面进行了广泛的研究。据报道,英军曾第二次世界大战期间采用蓝莓(富含花青素)作为保护暗适应的一项措施,但是缺乏足够的实验证据[2]。我国传统医学理论认为黑米具有“明目活血”之功效,而现代研究表明从黑米皮中提取的黑米花青素(blackriceanthocyanidin)其抗氧化活性明显高于常见的抗氧化剂如牛磺酸,类胡萝卜素和维生素C,安全性研究尚未发现其具有明显的急慢性毒副作用。为此,我们在前期工作基础上,进一步完善了视网膜光损伤模型,探讨了花青素类提取物对视网膜损伤的防护作用。
　　材料和方法：
　　72只成年SPF级雄性SD大鼠购自第四军医大学实验动物中心,根据实验需要分批进行实验,随机分至各组。其中花青素防护作用实验分为生理盐水组、花青素组和混合组,分别采用生理盐水、花青素提取物(纯度25％,由西安皓天生物制剂有限公司提供)及氢饱和生理盐水(按文献方法自制)与花青素提取物混合进行腹腔注射给药,花青素不同给药方式和时间实验分为对照组、灌胃和滴眼组,连续给药1周、2周、4周。利用本实验室自制的光损伤箱进行视网膜光损伤造模。采用RETIport视觉电生理系统(Roland,德国)进行视网膜电图(electroretinogram,ERG)检查,常规组织病理学制备观察石蜡标本,根据标本定位方向,以视盘为中心,上下每隔0.5mm进行切片观察,对各切片部位大鼠视网膜的外核层细胞数目进行计数。数据统计利用SPSS17.0软件进行分析。
　　结果：
　　1.不同环境温度:10±2℃(低温),20±2℃(室温)和30±2℃(高温)分组进行光暴露时,视网膜损伤程度(ERG波幅值和视网膜ONL细胞层数)高温组>低温组和室温组,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　2.花青素组(100mg/kg)、花青素-氢饱和生理盐水混合组(100mg/kg)和生理盐水组损伤眼各ERG反应的波幅值均下降,其中生理盐水组幅值下降最为明显,与自身对照眼比较差异具有统计学意义(P<0.05),花青素组与混合组双眼ERG幅值差值明显低于生理盐水组,具有统计学意义(P<0.05)。
　　三组大鼠损伤眼的视网膜ONL细胞层数均有所下降,部分位置的数据与自身对照眼相比,差异具有统计学意义(P<0.05),尤其以视网膜上部区域以及视神经乳头周边1-2mm范围内最为明显。花青素组及混合组损伤眼的ONL细胞层数明显多于生理盐水组,三组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　3.花青素(100mg/kg,1次/d)灌胃,1周时已经有一定的保护作用,到2周效应最为明显,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但是到4周时其效应出现下降。花青素滴眼(滴眼液浓度为4%,0.1ml/次/d)对视网膜光损伤的保护效应呈现时间依赖性的特点,1周时最低,4周时最高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：
　　1.实验室环境温度对大鼠视网膜光损伤造模有影响,在高温时会加重视网膜损伤,提示进行视网膜光损伤造模时应当注意通风,保持适宜的环境温度。
　　2.花青素类提取物对大鼠视网膜光损伤有一定的预防保护作用,花青素与氢饱和生理盐水混合组的作用与单纯使用花青素类提取物作用相似。
　　3.灌胃给药以及滴眼给药方式也具有预防视网膜光损伤的作用,其中灌胃方式的效果在2周时最为明显,滴眼连续给药方式在4周时效果最好。

目录

封面

声明

目录

缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

1 视网膜光损伤机制

2 视网膜光损伤的保护因子

3 花青素在眼科中的运用

正文

第一部分 实验环境温度对大鼠视网膜光损伤模型的影响

1 材料和方法

2 实验步骤

3 结果

4 讨论

第二部分 花青素类提取物对光诱导大鼠视网膜损伤的保护作用

1 材料和方法

2 实验步骤

3 结果

4 讨论

第三部分 花青素类提取物不同给药方式及时间对光诱导视网膜损伤的保护作用

1 材料和方法

2 实验步骤

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢