IL-1β介导下人牙周膜细胞MCP-1表达变化及其对单核细胞募集影响的研究

摘要

趋化因子是介导白细胞在组织中定向迁移的一类重要生物活性因子。趋化因子家族中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)主要通过趋化单核细胞向炎症部位定向迁移,参与机体多种免疫及炎症反应过程。目前研究显示,正畸所致炎性牙根吸收(OIIRR)过程中有大量单核细胞的募集现象,但这些外周血来源的单核细胞向炎症牙周部位募集的生物学机制还不清楚。最近有研究发现,在牙根吸收过程中牙周膜细胞中MCP-1表达显著增高,提示牙周膜细胞中MCP-1的高表达可能与局部炎症牙周组织中单核细胞的募集相关。
　　白细胞介素-1β(IL-1β)是一种重要的促炎因子,在牙根吸收过程中,一方面IL-1β可以促进破骨细胞的形成,调节破牙骨质细胞的功能;另一方面IL-1β可以促进牙周膜细胞中多种与牙根吸收相关的细胞因子分泌增加。那么,IL-1β能否上调人牙周膜细胞(hPDLCs)中MCP-1的表达,并通过MCP-1的趋化功能促进单核细胞的募集呢?
　　针对上述关于单核细胞向牙周组织募集机制的问题,本研究通过体外实验的方法,观察了炎性因子IL-1β对hPDLCs中MCP-1表达的影响,并进一步研究了IL-1β介导下hPDLCs分泌MCP-1对THP-1单核细胞趋化作用的影响,以初步分析和探讨炎性因子IL-1β作用下,单核细胞向局部牙周组织中募集的分子机制。
　　方法:
　　1.IL-1β对hPDLCs细胞中MCP-1表达影响的研究
　　hPDLCs分别与不同浓度IL-1β(0、1、5、10、25ng/ml)共孵育24h后,用RT-PCR方法、免疫荧光染色及westernblot方法检测hPDLCs中MCP-1的mRNA及蛋白表达;hPDLCs与10ng/ml的IL-1β孵育不同时间点(12、24、48、72h)后,用RT-PCR方法及westernblot方法检测hPDLCs中MCP-1的mRNA及蛋白表达。
　　2.IL-1β介导下hPDLCs细胞MCP-1表达增强对THP-1细胞募集作用影响的研究
　　hPDLCs分别与不同浓度IL-1β(0、1、5、10、25ng/ml)共孵育24h后,收集细胞上清液,应用Transwell小室观察不同浓度IL-1β作用hPDLCs后,其细胞上清液对THP-1细胞的趋化效应。
　　hPDLCs与IL-1β(0、10ng/ml)共孵育24h后,收集细胞上清液,将其随机分为实验组与对照组;实验组hPDLCs上清液再经MCP-1中和抗体处理,对照组hPDLCs上清液不经MCP-1中和抗体处理,应用Transwell小室观察两组细胞上清液对THP-1细胞趋化作用的影响。
　　结果:
　　1.IL-1β对hPDLCs细胞中MCP-1表达影响的研究结果:
　　RT-PCR结果显示,正常hPDLCs中可见MCP-1mRNA弱表达;低浓度IL-1β(1ng/ml及5ng/ml)对hPDLCs中MCP-1mRNA表达作用不明显(P>0.05);而高浓度的IL-1β(10ng/ml及25ng/ml)作用下,可以上调hPDLCs中MCP-1mRNA表达(P<0.05);10ng/mlIL-1β作用hPDLCs24h后,与最初的12h相比可增强MCP-1mRNA表达(P<0.05),但这种增强效应在继续作用48h及72h以后,与24h组相比并未发生明显改变。
　　免疫荧光染色结果显示,正常hPDLCs中MCP-1呈阴性或弱阳性表达;10ng/mlIL-1β作用24h后,hPDLCs中MCP-1呈强阳性表达,且阳性信号主要位于细胞浆中。
　　Western blot结果显示,低浓度IL-1β(1ng/ml及5ng/ml)对hPDLCs中MCP-1蛋白表达作用不明显(P>0.05);而高浓度的IL-1β(10ng/ml及25ng/ml)作用下,可以上调hPDLCs中MCP-1蛋白表达(P<0.05);10ng/mlIL-1β作用hPDLCs24h后,可增强MCP-1蛋白表达(P<0.05),但这种增强效应在继续作用48h及72h以后,与24h组相比并未发生明显改变。
　　2.IL-1β介导下hPDLCs细胞MCP-1表达增强对THP-1细胞募集作用的研究结果:
　　细胞迁移实验结果显示,IL-1b单独作用对THP-1细胞无趋化作用;当不同浓度IL-1b作用hPDLCs后,其上清液可以明显增强对THP-1细胞的趋化效应(P<0.05),而MCP-1抗体可显著抑制这种趋化作用(P<0.05)。
　　结论:
　　本研究结果显示,IL-1β作用下,hPDLCs中MCP-1表达增高;IL-1β通过上调hPDLCs中MCP-1的分泌,可以促进THP-1单核细胞的募集。以上结果提示,在牙根吸收过程中,局部IL-1β等炎症因子增多的环境,可能上调人牙周膜细胞中MCP-1的表达与分泌,这可能是牙根吸收过程中单核细胞向局部牙周组织募集的机制之一。

目录

封面

声明

目录

缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

一、 正畸所致炎性牙根吸收的分子生物学机制

二、 单核细胞的募集

正文

实验一 IL-1?对人牙周膜细胞中MCP-1表达影响的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 IL-1?介导下人牙周膜细胞MCP-1表达增强对THP-1细胞募集作用影响的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢

正畸临床病例