Slug、EMMPRIN和E-cadherin在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

摘要

涎腺腺样囊性癌是最常见的涎腺上皮恶性肿瘤之一，嗜神经侵袭及较易远处转移是它独特的生物学特征，也是其远期预后不佳的最重要原因之一。上皮-间质转化（EMT）在口腔恶性肿瘤的侵袭与转移中发挥了关键的作用，E-cadherin的下调是国际公认的EMT标志。而Slug作为锌指转录因子家族重要成员,在肿瘤组织中的表达水平显著高于正常组织。Slug通过调控肿瘤细胞的EMT过程，影响肿瘤的侵袭与转移，并与肿瘤的预后关系密切。EMMPRIN是在人体分布广泛的一种跨膜糖蛋白，其可通过多种途径促进SACC的局部侵袭和远处转移。研究表明在肝细胞癌的发展中Slug、EMMPRIN和E-cadherin的表达存在密切相关性，但Slug、EMMPRIN和E-cadherin在SACC的发生和发展过程中的相关性研究尚未见报道，需进一步研究。
　　实验一
　　目的：研究Slug、EMMPRIN和E-cadherin在SACC临床标本中的表达情况及其与临床病理特征间的关系。
　　方法：应用免疫组织化学染色方法检测115例SACC患者组织中Slug、EMMPRIN和E-cadherin的表达情况，并分析其与临床病理特点间的关系，应用SPSS17.0软件包对实验结果进行Fisher确切概率检验。
　　结果：免疫组化结果显示Slug和EMMPRIN在组织切片中强阳性表达，阳性率分别为76.5％和69.6%；E-cadherin弱阳性表达，阳性率为51.3%。Slug和EMMPRIN的表达与SACC肿瘤病理分型、临床分期、神经侵袭、复发、远处转移呈显著正相关（P<0.05），E-ca黏蛋白的表达与肿瘤病理分型、临床分期、神经侵袭、远处转移呈显著负相关（P<0.05）。同时，Slug的表达与EMMPRIN的表达呈显著正相关（P<0.05），EMMPRIN的表达与E-cadherin的表达呈显著的负相关（P<0.05），Slug的表达与E-cadherin的表达呈显著的负相关（P<0.05）。
　　结论：Slug、EMMPRIN和E-cadherin在SACC中的表达具有显著的相关性，三者的表达与SACC的临床病理特征密切相关。
　　实验二
　　目的：探讨Slug，EMMPRIN和E-ca在SACC细胞系中的表达相关性及对SACC生物学特性的影响。
　　方法：构建两种重组质粒载体(si-Slug，si-EMMPRIN)，重组质粒转染SACC-83细胞，并分成四组(G1：空白对照组；G2：si-Slug；G3：si-EMMPRIN；G4：si-Slug and si-EMMPRIN)。质粒转染后进行RT-PCR，Western Blot，形态学观察，划痕实验，侵袭实验，迁徙实验等实验，并对结果进行分析。
　　结果：沉默Slug能显著下调Slug和EMMPRIN的mRNA和蛋白表达水平（P＜0.01），沉默EMMPRIN可显著下调EMMPRIN的mRNA和蛋白表达水平，但对Slug的mRNA和蛋白表达水平无显著影响（P＜0.01）；沉默Slug、EMMPRIN均使SACC细胞EMT能力降低；沉默Slug、EMMPRIN均可降低SACC细胞的迁徙、周围神经侵袭能力。
　　结论:细胞实验显示沉默Slug、EMMPRIN能显著抑制SACC-83细胞的运动能力和周围神经侵袭能力；Slug通过上调EMMPRIN引起E-cadherin的下调，从而诱导EMT的发生，其在SACC的嗜神经侵袭中发挥重要作用。Slug、EMMPRIN可能成为SACC基因治疗的新靶点。

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缩略语表

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前言

文献回顾

一、涎腺腺样囊性癌的临床特点

1. 病理特征

2．临床特征

3．预后因素

4．治疗进展

二、SACC嗜神经侵袭的研究进展

1. 解剖结构基础

2.雪旺氏细胞（Schwann cell）与肿瘤细胞关系

3. 肿瘤微环境与SACC嗜神经侵袭的关系

4. 细胞因子与SACC嗜神经侵袭的关系

三、涎腺腺样囊性癌上皮间质转化研究进展

1．E-cadherin、N-cadherin与EMT关系

2．EMT在肿瘤演进中的研究新进展及与SACC嗜神经侵袭研究进展

3．与SACC嗜神经侵袭密切相关的Slug 、EMMPRIN分子在EMT中的作用

4．研究设想

第一部分 Slug、EMMPRIN和E-ca黏蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.2 主要试剂及设备

1.3 方法

1.4 结果判断标准

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 Slug、EMMPRIN和E-ca黏蛋白在SACC中的表达

2.2 E-ca黏蛋白、Slug和EMMPRIN在腺样囊性癌中的表达及与临床病理特征的关系

2.3 Slug、EMMPRIN和E-ca黏蛋白在SACC中表达的相关性

3 讨论

第二部分 Slug、EMMPRIN和E-cadherin表达相关性及对涎腺腺样囊性癌细胞生物学特性的影响

1 材料与方法

1.1 主要试剂和设备

1.2 研究对象及分组

1.3 实验方法

1.4统计学处理

2 结果

2.1 菌液PCR鉴定

2.2 质粒测序

2.3 转染效率观察

2.4 RT-PCR、Western-blot结果分析

2.5 细胞形态学观察结果

2.6 划痕及迁徙、侵袭实验结果分析

2.7 体外嗜神经侵袭实验结果分析

3 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢