甘草酸调节紧密连接蛋白修复溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的药理作用研究

摘要

研究的目的与意义：
　　溃疡性结肠炎病因复杂，临床治疗以单一的抗炎治疗为主，缺乏综合治疗方案。甘草治疗“久痢”记载于历代医学经典，其活性成分甘草酸二铵在溃疡性结肠炎中的抗炎作用已有大量文献报道。最新的发病机制研究表明，肠黏膜屏障损伤，是溃疡性结肠炎发生与发展的关键因素，也是导致肠通透性增加、腹泻反复发作的主要原因。目前关于甘草对溃疡性结肠炎时肠黏膜屏障的损伤是否具有修复作用尚无文献报道。鉴于甘草治疗“久痢”的作用特点，本课题以甘草活性成分对肠黏膜屏障关键结构蛋白——紧密连接蛋白的调节作用为核心，研究甘草对溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的修复作用，以期阐明甘草通过修复肠黏膜屏障损伤，治疗溃疡性结肠炎的药理作用机制。
　　采用方法：
　　本课题首先优化溃疡性结肠炎模型小鼠的制备方法；然后以疾病活动指数 DAI评分、HE染色评价组织学损伤以及小鼠死亡率为指标，柳氮磺胺吡啶为阳性对照药物，采用平行随机对照的实验设计，研究甘草主要活性成分——甘草酸和甘草次酸对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜病理损伤状态的改善作用；最后根据药效学实验结果，以探针药物乳果糖/甘露醇比值为指标，重点研究甘草主要药效成分甘草酸对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响，并采用western-blot和免疫组化等技术，在组织水平上研究甘草酸对肠黏膜屏障关键结构蛋白——紧密连接蛋白 c laudin-2、c laudin-4、occludin的蛋白含量和细胞定位的调节作用，阐明甘草修复肠黏膜屏障损伤的药理作用机制。
　　主要研究结果：
　　与小鼠自由饮用葡聚糖硫酸钠相比，定量灌胃造模方法的各项指标（DAI，组织学评分，MPO酶活性）小鼠组内变异明显降低。甘草活性成分甘草酸、甘草次酸对模型小鼠肠黏膜病理损伤的药效学实验表明，与模型组相比，甘草酸能够显著抑制模型小鼠肠黏膜屏障损伤导致的体重下降、脓血便等体征，降低DAI评分；HE染色病理学评分和小鼠存活率实验均显示甘草酸组小鼠结肠黏膜屏障损伤显著减轻；但是与模型组相比，300mg/kg灌胃给药剂量的甘草次酸组小鼠肠黏膜损伤加重。进一步的乳果糖/甘露醇比值实验显示，甘草酸能够剂量依赖性地降低大分子乳果糖通过肠黏膜的量，表明甘草酸能够降低肠黏膜通透性，修复肠黏膜屏障损伤。免疫组化实验表明，甘草酸能够纠正紧密连接蛋白occludin在结肠上皮细胞的错误定位。western-blot分析表明，甘草酸能够剂量依赖性地抑制模型小鼠封闭性紧密连接蛋白claudin-4及occludin的下调，抑制渗透性紧密连接蛋白claudin-2的上调。
　　结论：
　　甘草中的甘草酸具有降低溃疡性结肠炎时肠黏膜通透性，修复肠黏膜屏障损伤的药理作用。其药理作用机制在于，甘草酸能够抑制溃疡性结肠炎时肠上皮细胞紧密连接蛋白的异常表达和错误定位。本研究为甘草治疗“久痢”的现代药理学阐释及其在溃疡性结肠炎药物治疗中的应用提供了实验基础。

目录

声明

缩略语表

前言

文献回顾

一、溃疡性结肠炎概述

二、溃疡性结肠炎的发病机制

三、肠黏膜屏障和紧密连接蛋白

四、现有治疗溃疡性结肠炎的药物及其治疗方案的不足

五、甘草研究进展

第一部分 动物模型的优化

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 甘草活性成分对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜损伤的修复作用研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第三部分 甘草酸修复溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的作用机制研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢