大鼠血管平滑肌细胞蛋白组学的研究以及尼古丁对血管平滑肌细胞蛋白和基因表达影响的研究

摘要

本文在实验中应用蛋白组学的研究方法观察了尼古丁刺激组(处理组)血管平滑肌细胞和非刺激组(对照组)血管平滑肌细胞的蛋白表达图谱，并选择2倍以上差异表达的蛋白质(表达上调或下调)利用肽指纹质谱和串联质谱法对其进行鉴定。并在随后的实验中采用荧光定量RT-PCR方法对这些蛋白的编码基因进行了体外扩增，了解其基因的表达变化。目的是采用先进的科研手段，从分子生物学水平对尼古丁的致病机理进行探讨。 剖析了大鼠血管平滑肌细胞双向电泳技术平台的建立目的强调了蛋白组学中最重要的核心技术即是蛋白质双向电泳，双向电泳的分辨率涉及样品处理、等电聚焦、SDS-PAGE凝胶电泳、染色等技术，为了获得良好的大鼠血管平滑肌细胞的蛋白表达谱，我们对双向电泳实验条件进行优化处理。 本文运用该项技术，我们可以对DNA、RNA样品进行定量或定性分析。定量分析包括绝对定量和相对定量分析。并应用荧光相对定量的简要计算方法2-△△CT对尼古丁引起的基因表达变化作出了相对定量分析。发现，尼古丁可以诱导或减少某些基因的表达，其引起基因表达变化的趋势同蛋白表达的变化趋势是一致的。说明，尼古丁可以同时在基因和蛋白水平改变细胞的形态、功能特性等。有助于我们对尼古丁的致病机理有更加深刻和全面的了解。

目录

文摘

英文文摘

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前言

一大鼠血管平滑肌细胞双向电泳技术的建立

材料和方法

结果

结论

二.尼古丁对大鼠血管平滑肌细胞蛋白表达的影响

前言

材料和方法

结果

1.血管平滑肌细胞尼古丁受体α亚单位mRNA的RT-PCR扩增

2.尼古丁对细胞少性的影响

3.尼古丁刺激后差异表达蛋白点的选择

4.PMF质谱分析和因特网蛋白质数据库搜索

5.串联质谱法(MS/MS)鉴定蛋白质

结论

第三部分尼古丁对大鼠血管平滑肌细胞基因表达的影响

前言

材料和方法

结果

结论

讨论

参考文献

综述 蛋白质组学研究的进展及在心血管领域的应用

参考文献

个人简历

致谢