甲氨蝶呤联合环磷酰胺对大鼠毒副作用和细胞周期、DNA损伤作用机制的实验研究

摘要

类风湿关节炎(RA)是高度致残性自身免疫性疾病，改善病情抗风湿药物(DMARDs)的联合用药仍然是RA治疗的主流。 由于RA有许多类似肿瘤的特点，如滑膜细胞和淋巴细胞的细胞周期失控、凋亡异常等。近年来，造血干细胞移植、抗CD20单克隆抗体治疗难治性RA，均是源于血液病治疗的成功经验。肿瘤联合化疗的理论依据是选用作用于不同细胞周期的药物进行联合。鉴于此，本研究在治疗RA的临床实践中，依据肿瘤联合化疗的理论，联合细胞周期特异性药物(MTX)与周期非特异性药物(CTX)小剂量间歇给药治疗RA，回顾性分析资料显示联合组较小剂量单用药组疗效显著(缓解率80％)，而副作用无明显增加。分析我们实验性治疗RA疗效好、副作用小的原因。 基于以往临床实践的基础设计了本研究。由于RA的治疗是长期的，而RA相关的关节炎大鼠模型在给药后存活期难以保证。所以为了验证长期给药后联合方案的毒副作用及联合作用机制，本研究对正常大鼠进行了长达27周的实验研究。 [研究目的]： ①通过检测不同剂量MTX、CTX单独或联合用药后对血常规、肝、肾功能和相应脏器病理变化的影响，探讨联合方案的毒副作用。 ②应用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)，以彗尾长度和慧星频率作为观测指标，检测不同剂量MTX、CTX单独或联合用药后对大鼠肝脏、肾脏细胞的DNA损伤，进一步探讨联合组的毒副作用机制。同时检测对大鼠PBL、骨髓、脾脏淋巴细胞的DNA损伤，探讨MTX、CTX可能的联合作用机制。 ③通过流式细胞术(FCM)检测脾脏、骨髓及PBL在细胞周期的各期细胞比例及G1期细胞周期蛋白(cyclin)D1，探讨联合方案对脾脏、骨髓、PBL细胞周期和cyclin D1的影响是否具有协同作J}j，探讨是否通过影响脾脏、骨髓、PBL的cyclin D1途径实现对细胞周期的影响。 [结沦]： 1.MTX联合CTX小剂量间歇给药与单用药比较毒副作用并没有增加，比较安全。CTX隔同给药组的毒副作用明显大于其它各组。表现为体重不增、意外死亡大鼠数量明显增多、肝脏、肾脏病理变化严重。 2.生化指标ALT、AST、BUN、Cr并不能及时地反映肝脏、肾脏早期病理改变。SCGE检测PBL的DNA损伤与盯脏、肾脏的DNA损伤和肝、肾病理改变有明显的相关性，初步推测可以作为检测药物副作用的敏感指标。 3.CTX对PBL、骨髓、脾脏淋巴细胞DNA的损伤远重于MTX。PBL的DNA损伤越严重，PBL计数越少。推测CFX通过对细胞DNA损伤引起PBL数量下降。MTX联合CTX对PBL、骨髓、脾脏淋巴细胞DNA的损伤与小剂量CTX组比较有增加趋势。 4.MTX单独使用使PBL、骨髓、脾脏细胞S期细胞比例明显降低，主要通过影响细胞G0/G1→S期的转换发挥作用，进一步验证MTX为周期特异性药物。CTX单独使用对细胞各期比例影响较小，CTX作为细胞周期非特异性药物，主要通过细胞的DNA损伤发挥作用。 5.MTX单独使用使G0/G1期细胞比例增高，CTX单独使用使G0/G1期细胞比例轻度增高，但两药联合使用后G0/G1期细胞比例明显下降，两药的交互作用表现为拮抗作用。推测每周给予小剂量MTX将多数细胞阻滞在G0/G1期，在此基础上，给予小剂量CTX，能更有效地杀伤阻滞于G0/G1期的细胞。从治疗角度来讲，达到了协同作用。 6.MTX、CTX联合方案给药24小时对细胞周期的影响并非通过PBL、骨髓和脾脏的cyclin D1途径来实现。是否存在其它机制尚有待于进一步研究。

目录

论文说明：英文缩写

摘要

前言

材料与方法

结果

第二部分 SCGE检测甲氨蝶呤、环磷酰胺对大鼠脏器细胞DNA的损伤

第三部分MTX、CTX对大鼠脾、骨髓、PBL细胞周期和cyclin D1 的作用

讨论

结论

参考文献

附图一

附图二

综述 类风湿关节炎治疗新靶点--高迁移率族蛋白HMGB1

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