山西晋中地区淋球菌对四类抗生素的敏感性及其分子机制研究

摘要

目的：了解山西省晋中地区淋球菌对4种抗生素的耐药率及耐药特点；分析淋球菌对青霉素，头孢曲松，氟喹诺酮类药物耐药的分子机制；淋球菌MtrRCDE排出系统与多重耐药的关系及其在淋球菌对氟喹诺酮，青霉素和头孢类抗生素不同程度耐药中的作用。 方法：(1)采用纸片扩散法对山西晋中地区30株淋球菌临床分离株进行青霉素，四环素，环丙沙星，头孢曲松四种药物敏感性测定。E试验对30株淋球菌进行四种抗生素的MICs测定。(2)纸片碘量法对产青霉素酶淋球菌(PPNG)进行检测。(3)PCR法扩增gyrA、parC、penA、ponA、porB基因和mtrR启动子区域的13bp回文序列。(4)基因测序法对目的基因进行测序分析。 结果： (1)淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢曲松的耐药率分别为93.3％、80.0％、96.7％、0.0％，同时耐2种及以上抗菌药物的多重耐药率为83.3％。 (2)30株淋球菌中28株对青霉素耐药，其中β—内酰胺酶阳性菌株(PPNG)共13株(46.4％)，阴性菌株15株(54.6％)。 (3)15株β—内酰胺酶阴性，且对青霉素敏感性降低的淋球菌(CMRNG株)在penA基因的镶嵌状区域没有发现突变，但在mtrR启动子区发生A/T碱基缺失，还有2株存在penB基因区的双位点突变Gly-101—Asp，Ala-102-Asp。5株高水平耐青霉素株(MIC＞8ug/mL)均存在ponA基因单位点的突变Leu-421—Pro。 (4)本次试验中，我们发现一株对头孢曲松低敏且具有多重耐药表型的菌株，PCR扩增测序后发现其存在mtrR、ponA、penB及gyrA和parC基因的突变。 (5)30株耐氟喹诺酮类药物淋球菌均存在gyrA基因单或双位点突变，突变形式主要是Ser-91—Phe和Asp-95-Gly．20株高水平耐氟喹诺酮菌株(MIC大于等于4mg/L．)存在gyrA基因双位点和parC基因单或多位点突变。ParC基因最多见的突变类型是Ser-87—Arg和Tyr-104—Tyr的双位点突变。 (6)20株多重耐药株中20株的启动子区域发生了突变，并且突变类型一致，在第13个碱基的回文序列中发生了单个A/T碱基的缺失。 结论： (1)山西晋中地区淋球菌对环丙沙星耐药已经很普遍，对青霉素，四环素的耐药率保持在较高水平，头孢曲松仍可作为本地区治疗淋病的首选药物，研究还发现本地区淋球菌的多重耐药现象十分严重。 (2)本研究penA、ponA和penB基因突变与染色体介导的青霉素耐药密切相关，其中ponA基因突变与高水平染色体介导的青霉素耐药有关。 (3)本次实验表明，淋球菌对头孢曲松类耐药与mtrR、penB及gyrA和parC这些基因位点突变相关，与penA基因无关。 (4)淋球菌gyrA和parC基因突变在氟喹诺酮类耐药中起着重要作用，parC基因突变是导致淋球菌对环丙沙星高水平耐药的重要原因。 (5)mtrR启动子区域基因突变引起淋球菌对青霉素、头孢曲松、氟喹诺酮的低水平耐药。 (6)氟喹诺酮靶酶和MtrRCDE排出系统同时突变是淋球菌对氟喹诺酮类药物耐药的重要机制。

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