MIF在不同宫颈癌细胞株中的表达及对宫颈癌细胞株增殖的影响

摘要

宫颈癌，是最常见的恶性肿瘤之一，发病率位于女性肿瘤的第二位。山西省是国内外罕见的宫颈癌高发区，且发病人群有年轻化趋势，因此宫颈癌是严重威胁我省妇女健康的疾病之一。肿瘤的主要特征是恶性细胞的持续性增殖。本课题组前期对早期宫颈鳞癌(SCC)进行了cDNA基因芯片筛查，发现MIF在早期宫颈鳞癌有淋巴转移组织中表达上调，提示MIF可能促进宫颈癌的发生发展。
　　 目的：研究MIF、CD74、PI3K、cyclinD1、Ki67在人宫颈癌细胞株C33A、Siha、Caski中的表达，探索MIF与CD74在宫颈癌发生发展中的作用，探索MIF和PI3K、cyclinD1、Ki67在宫颈癌恶性增殖过程中的作用与联系，以期为宫颈癌的深入研究提供新的思路和方法。
　　 方法：首先，采用免疫细胞化学、Western Blot、ELISA检测人宫颈癌株C33A、Siha、Caski中MIF、CD74、PI3K、cyclinD1、Ki67的表达；其次，利用细胞增殖实验(MTT)观察人重组MIF刺激后宫颈癌细胞株C33A、Siha的增殖情况，并通过免疫细胞化学、Western blot技术检测在人重组MIF刺激后MIF、PI3K、cyclinD1、Ki67在细胞株中的蛋白表达；最后，再次运用MTT法检测ISO-1(MIF特异抑制剂)对宫颈癌肠转移细胞株Caski增殖作用的影响，采用免疫细胞化学、Western blot、ELISA检测MIF、PI3K、cyclinD1、Ki67在ISO-1处理后的Caski细胞株中的蛋白表达。
　　 结果：MIF、CD74、PI3K、cyclinD1、Ki67在人宫颈癌细胞株C33A、Siha、Caski中均有阳性表达，且在高转移细胞株Caski中的表达最高，其次为在HPV16阳性的Siha细胞中的表达，在HPV阴性的C33A细胞中的表达最弱，三者相比差异有显著性(P＜0.05)；同样，上述三种宫颈癌细胞株均可分泌一定量的MIF蛋白，在高转移细胞株Caski中的分泌量明显高于HPV16阳性的Siha细胞，在HPV阴性的C33A细胞中的表达最弱，三者相比差异有显著性(P＜0.05)。
　　 人重组MIF可明显促进宫颈癌细胞的增殖活性，并且促进MIF、PI3K、cyclinD1、Ki67各细胞中的蛋白表达。
　　 给予MIF特异抑制剂ISO-1后，人宫颈癌肠转移细胞株Caski的增殖活性明显降低，MIF、PI3K、cyclinD1、Ki67的蛋白表达量显著下降。
　　 结论：MIF在各宫颈癌细胞株中表达程度不同，其表达强弱与宫颈癌细胞高危型HPV感染及转移潜能有关，说明MIF是参与炎症与肿瘤发生发展的重要细胞因子。MIF可直接促进宫颈癌细胞的增殖，或通过上调cyclinD1的表达，进而影响细胞周期进展，促进癌细胞的恶性增殖。ISO-1可直接抑制MIF在宫颈癌细胞中的表达与分泌，抑制宫颈癌细胞的增殖，或下调cyclinD1的表达，降低宫颈癌细胞的增殖活性。
　　 这一过程可能需要PI3K/Akt细胞信号通路的参与，但其具体机制需进一步研究。针对MIF在宫颈癌细胞株增殖中作用机制的研究将有助于进一步了解宫颈癌的发生与发展，为宫颈癌的临床诊断提供理论依据，为宫颈癌的个性化治疗寻找一条新思路。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文名词缩略表

声明

前言

第一部分MIF及相关因子在人宫颈癌细胞株中的表达及意义

实验一免疫细胞化学检测MIF及相关因子在宫颈癌细胞株中的表达

实验二Western blot法检测MIF、PI3K、cyclinD1 、Ki67蛋白在人宫颈癌细胞株中的表达

实验三ELISA测MIF在宫颈癌细胞培养上清液中蛋白的浓度

讨论

附图

第二部分rhMIF刺激人宫颈癌细胞株的增殖及相关因子的表达

实验一 MTT检测rhMIF刺激后人宫颈癌细胞株C33A、Siha的增殖

实验二 免疫细胞化学检测rhMIF 刺激后人宫颈癌细胞中MIF、PI3K、cyclinD1、Ki69的表达

实验三 Western blot检测rhMIF刺激后人宫颈癌细胞中MIF、P13K、CyclinD1、Ki67的蛋白表达

讨论

附图

第三部分ISO-1抑制宫颈癌细胞株CaSki的增殖活性及蛋白表达

实验一 MTT法检测ISO-1抑制人宫颈癌细胞CaSki的增殖活性

实验二 免疫细胞化学法检测ISO-1抑制宫颈癌细胞CaSki的MIF、PI3K、cyclinD1、Ki67的表达

实验三Western blot检测ISO-1抑制人宫颈癌细胞株CaSki中MIF、PI3K、CyclinD1、Ki67的蛋白表达

实验四 ELISA检测ISO-1刺激后人宫颈癌细胞株培养上清液中MIF的蛋白含量

讨论

附图

结论

参考文献：

综述：MIF对细胞增殖的影响

个人简历

致谢