嗜酸乳杆菌对实验性结肠炎小鼠肠黏膜趋化因子RANTES和MCP-1表达的影响

摘要

目的：
　　 观察嗜酸乳杆菌对DSS诱导的小鼠急性结肠炎肠黏膜趋化因子RANTES和MCP-1表达的影响，从而探讨嗜酸乳杆菌治疗UC的效果及其可能的作用机制。
　　 方法：
　　 7-8周龄雄性BALB/c小鼠70只，清洁级，体重21.0±2.0克，随机分为七组，分别为模型对照(DSS+空针插胃)组、阴性对照(DSS+生理盐水)组、阳性对照(DSS+美莎拉嗪)组、嗜酸乳杆菌低(DSS+106CFU/ml)、中(DSS+107CFU/ml)、高(DSS+108CFU/ml)剂量组、正常对照组，每组10只。正常对照组自由饮用双重蒸馏水，其余六组小鼠自由饮用2.5％DSS(分子量36000-50000)7天建立急性UC动物模型。从造模前2天开始，阴性组、阳性组、嗜酸乳杆菌低、中、高剂量组分别给予无菌生理盐水、美莎拉嗪(30.25mg/ml)、嗜酸乳杆菌菌液1.0×106CFU/ml、1.0×107CFU/m1、1.0×108CFU/ml灌胃，每次0.2ml，一天2次。模型组给予空针插胃。造模期间，每天观察小鼠进食、活动等一般情况及体重、大便性状和隐血情况，评估结肠炎严重程度。造模第八天上午折颈法处死小鼠，取出结肠，测量回盲部至肛门的长度。后用预冷生理盐水冲洗净结肠，分别在结肠末端(距肛门1cm)、结肠中段、结肠上段(距盲肠1cm)处各剪取1cm长的结肠，末端结肠以4％的甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片(4μm)、HE染色，观察组织学改变。其余结肠-70℃保存以备逆转录PCR(RT-PCR)。观察指标包括：疾病活动指数(DAI)、结肠长度、组织学损伤评分；免疫组化SP法从蛋白水平检测趋化因子RANTES和MCP-1的表达量；半定量RT-PCR方法从mRNA水平检测趋化因子RANTES和MCP-1及核因子STAT1的表达。
　　 结果：
　　 1.嗜酸乳杆菌各干预组及美莎拉嗪组小鼠一般情况好，DAI积分相对降低，与模型组和阴性组相比，差异有统计学意义(p＜0.05)；嗜酸乳杆菌高剂量组结肠长度大于模型对照组，差异有统计学意义(p＜0.05)；与正常对照组相比无统计学意义(p＞0.05)。
　　 2.各组UC小鼠组织学损伤评分均高于正常组(p＜0.05)，嗜酸乳杆菌各干预组小鼠组织学损伤评分均降低，与模型组、阴性组相比，差异有统计学意义(p＜0.05)。嗜酸乳杆菌高剂量组与美莎拉嗪组相比，差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　 3.UC小鼠肠黏膜趋化因子RANTES和MCP-1的蛋白表达量较距常组高(p＜0.05)，嗜酸乳杆菌和美莎拉嗪能降低趋化因子RANTES和MCP-1蛋白的表达量，嗜酸乳杆菌剂量越高效果越显著(p＜0.05)。UC小鼠肠黏膜趋化因子RANTES和MCP-1的mRNA表达趋势与蛋白表达趋势相一致，嗜酸乳杆菌能降低其表达量，且嗜酸乳杆菌高剂量组优于低剂量组(p＜0.05)。
　　 4.美莎拉嗪和嗜酸乳杆菌各干预组对STAT1表达均有抑制作用，并且美莎拉嗪的抑制作用要优于嗜酸乳杆菌各剂量组(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1.嗜酸乳杆菌对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有治疗作用，疗效与剂量呈正相关。
　　 2.嗜酸乳杆菌能有效治疗急性期UC小鼠，其机制可能与嗜酸乳杆菌通过抑制核转录因子STAT1的激活，从而下调趋化因子在结肠组织的表达，减少炎症细胞的募集和活化，在炎症的起始阶段参与防治UC有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

前言

第一章材料与方法

第二章结果

第三章讨论

第四章结论

参考文献

附 录

综述C-C趋化因子在溃疡性结肠炎发病中的作用

攻读硕士学位期间论文发表情况

个人简历

致 谢