淫羊藿苷对人外周血内皮祖细胞数量及功能的影响

摘要

目的：观察中药淫羊藿苷对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量和功能的影响。
　　 方法：
　　 1、淫羊藿苷药液配制及保存万分之-电子天平称取2mg冻干粉末，用加样器取2m1DMSO(二甲基娅枫)溶解于5ml离心管中，轻摇振荡完全溶解后用加样器取20ull以溶液于小烧杯中加20mlPBS稀释，用微孔滤膜加压过滤除菌(滤膜孔直径0.22um)后即制得Ⅰ以药液母液20ml，浓度为1ug/ml。分装4℃冷藏备用。
　　 2、人外周血EPCs的培养及鉴定采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞，将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板，M199培养液培养7d后，收集贴壁细胞。经激光共聚焦显微镜鉴定，FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞被认为是正在分化的EPCs、流式细胞仪检测其表面标志CD34、CD133进一步鉴定为EPCs。
　　 3、中药淫羊藿苷对EPCs数量及功能的影响取培养7天贴壁的EPCs用于研究，随机分为4组：对照组、淫羊藿苷低剂量干预组、淫羊藿苷中剂量干预组、淫羊藿苷高剂量干预组。用含低、中、高剂量淫羊藿苷药液的条件培养液分别培养12h、24h、48h后，倒置相差显微镜下观察EPCs生长情况，分别采用细胞计数法、黏附能力测定实验和噻唑蓝(MTT)比色实验和观察EPCs的数量、黏附能力及增殖能力。
　　 结果：
　　 1、EPCs的培养及鉴定分离的单个核细胞培养4天后，可见细胞集落形成，7天后形成了梭形的内皮样细胞，并可见线状结构。用Dil-acLDL和FITC-UEA-I对细胞染色后，通过激光共聚焦显微镜鉴定，双染色阳性细胞被认为是正在分化的EPCs。流式细胞仪示贴壁细胞表达CD34阳性率(38.36±3.70)％，CD133阳性率为(13.91±1.47)％。
　　 2、中药淫羊藿苷对人外周血EPCs数量及功能的影响结果显示：与对照组比较，低、中剂量淫羊藿苷显著增加EPCs的数量，且显著改善EPCs黏附、增殖能力，并且其影响呈时间依赖性，低剂量淫羊藿苷作用后24h开始高于对照组，于72h达到高峰，中剂量淫羊藿苷作用后48h开始高于对照组，于72h达到高峰，高剂量淫羊藿苷仅于作用72h后高于对照组(P＜0.05)。此外，中药淫羊藿苷在干预EPCs48h、72h时，对EPCs数量及黏附、增殖能力的影响呈一定的剂量相关性，中剂量组较低、高剂量组作用显著(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1、中药淫羊藿苷可以增加人外周血EPCs的数量、可以促进其黏附功能和增殖功能。中药淫羊藿苷对EPCs的影响呈一定的量效和时效关系，以中剂量淫羊藿苷作用72h时最为显著。
　　 2、中药淫羊藿苷可以改善EPCs的数量和功能，这可能是其防治血管内皮细胞损伤及内皮功能障碍相关性疾病的作用机制之一。

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