20S蛋白酶体对SVZ神经干细胞增殖潜能的调控作用

摘要

目的：观察小鼠室管膜下区(Subventricularzone,SVZ)神经干细胞(Neural Stem Cells，NSCs)20S蛋白酶体的表达，以及机体老化进程中SVZ20S蛋白酶体的活性变化，旨在揭示蛋白酶体活性改变对NSCs增殖潜能的影响，为延缓机体衰老进程提供新的突破方向。
　　 方法：将小鼠分为胚胎(Embryonic14 days，E14)、新生(Postnatal day，P0)、幼年(Postnatal30 days，P30)、成年(Postnatal60 days，P60)、老年(Postnatal540 days，P540)5组。⑴应用20S蛋白酶体/nestin(神经干细胞标志物)免疫荧光双标法观察SVZ NSCs20S蛋白酶体的表达。⑵提取E14、P0、P30、P60、P540小鼠SVZ蛋白，通过Western Blot半定量分析不同年龄阶段小鼠20S蛋白酶体的表达变化。⑶提取E14、P0、P30、P60、P540小鼠SVZ蛋白，应用荧光分光光度法检测不同年龄阶段小鼠20S蛋白酶体的活性。⑷将1μl MG132(30mg/kg)注入成年小鼠侧脑室，分别在3d、7d后腹腔注射BrdU(5mg/kg)，通过免疫荧光染色观察BrdU阳性细胞数，检测蛋白酶体抑制剂对NSCs增殖潜能的影响。
　　 结果：①20S蛋白酶体免疫阳性细胞沿侧脑室侧壁分布，阳性细胞呈圆形，胞浆与胞核内均可见阳性表达，并且20S蛋白酶体阳性表达与NSCs标志物nestin共存，提示20S蛋白酶体可能对NSCs具有调控作用。②Western Blot结果表明随年龄增加20S蛋白酶体表达水平逐渐降低，其中胚胎小鼠SVZ20S蛋白酶体表达量最高(1.22±0.1)，老年小鼠20S蛋白酶体表达量最低(0.6±0.05)，二者相比差异有统计学意义(P＜0.05)。③蛋白酶体活性检测结果表明随着年龄增加蛋白酶体活性出现递减趋势，其中胚胎、新生、幼年小鼠20S蛋白酶体活性显著高于老年小鼠(P＜0.05)，但成年小鼠与老年小鼠20S蛋白酶体活性差异无统计学意义(P＞0.05)。④MG132干预实验结果显示注入MG1323d、7d后脑室SVZBrdU阳性细胞减少，统计分析结果显示注入MG1323d后BrdU阳性细胞数减少(2±0.1)，与溶剂对照DMSO组(22±3)相比差异有统计学意义(P＜0.05)；注入MG1327d后BrdU阳性细胞数减少(3±1)，与溶剂对照DMSO组(8±3)相比差异有统计学意义(P＜0.05)，提示蛋白酶体活性降低可导致NSCs增殖潜能下降。
　　 结论：⑴.NSCs表达20S蛋白酶体，且随年龄增加SVZ NSCs20S蛋白酶体表达量及活性逐步降低，提示20S蛋白酶体活性降低可能是导致NSCs衰老进而使机体老化的关键因素。⑵应用蛋白酶体抑制剂能够显著抑制NSCs的增殖潜能，提示蛋白酶体功能异常导致NSCs库耗竭可能是衰老相关疾病发生的重要原因。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

前言

材料和方法

1.材料和试剂

2.实验方法

3.图像分析和统计学处理

结果

1.20S、nestin的免疫荧光染色结果

2.Western Blot方法检测小鼠SVZ 20S的表达

3.20S蛋白酶体活性检测结果

4.蛋白酶体抑制剂MG132注射后，免疫荧光染色BrdU结果

讨论

1.SVZ神经干细胞的研究

2.SVZ神经干细胞在不同年龄阶段的变化

3.蛋白酶体的组成和功能

4.20S蛋白酶体对SVZ神经干细胞增殖潜能的调节

结论

参考文献

综述：泛素蛋白酶体在神经干细胞分化增殖中的作用

个人简历

致谢