ADMA对单核细胞分化为巨噬细胞的影响及其对MCP-1及LOX-1表达的作用

摘要

目的：动脉粥样硬化(AS)是动脉的一种慢性炎症性病变，其发生过程中单核细胞向巨噬细胞的转化是个非常关键的环节。不对称二甲基精氨酸(ADMA)作为内源性一氧化氮合酶抑制剂(NOS)可诱导NO解偶联并增加氧自由基的产生，参与促进AS发生发展的炎症反应过程，然而，ADMA在单核细胞转化为巨噬细胞过程中的作用尚不明确。本课题通过观察ADMA对单核细胞转化为巨噬细胞过程中分泌重要炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及植物凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的影响，探讨ADMA在单核细胞转化为巨噬细胞过程中的作用。
　　 方法：(1)ADMA对单核细胞分泌MCP-1的影响：培养人单核细胞，分别用ADMA(20mmol/L)、ADMA(20umol/L)及L-精氨酸(1.2mmol/L)孵育单核细胞48h，酶联免疫吸附法测定上清液中MCP-1含量，逆转录聚合酶链反应法测定MCP-1mRNA的表达；(2)ADMA对单核细胞转化为巨噬细胞过程中LOX-1表达的影响：培养人单核细胞，并用佛波酯诱导其分化为巨噬细胞，在此过程中分别用ADMA(20umol/L)、ADMA(20umol/L)及L-精氨酸(1.2mmol/L)、L-精氨酸(1.2mmol/L)孵育单核细胞48h，Westernblotting法测定细胞中LOX-1的蛋白表达量，逆转录聚合酶链反应法测定LOX-1mRNA的表达。所有数据以均数±标准差表示，采用SPSS16.0软件进行统计学处理，多组间比较用单因素方差分析及析因分析，采用q检验进行两两比较。P＜0.05确定差异有统计学意义。
　　 结果：
　　 (1)与空白对照组相比，20umol/LADMA作用于人单核细胞48h，MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显提高(P＜0.01)。
　　 (2)与空白对照组相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸作用于人单核细胞48h，MCP-1的mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　 (3)与20mmol/LADMA相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸作用于人单核细胞48h，MCP-1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.01)。
　　 (4)与空白对照组相比，20umol/LADMA作用于加入佛波酯的人单核细胞48h，LOX-1的mRNA表达升高(P＜0.05)，蛋白表达水平明显升高(P＜0.01)。
　　 (5)与空白对照组相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人单核细胞48h，LOX-1的mRNA和蛋白表达水平有提高(P＜0.05)。而单用1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人单核细胞48h，LOX-1的mRNA和蛋白表达水平与空白对照组相比无明显差异(P＞0.05)。
　　 (6)与20umol/LADMA组相比，20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人单核细胞48h，LOX-1的mRNA表达水平降低(P＜0.05)，蛋白表达水平明显降低(P＜0.01)，单用1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人单核细胞48h，LOX-1的mRNA降低(P＜0.05)，蛋白表达水平与20umol/LADMA组相比明显降低(P＜0.01)。
　　 (7)与20umol/LADMA+1.2mmol/LL-精氨酸相比，单用1.2mmol/LL-精氨酸作用于加入佛波酯的人单核细胞48h，LOX-1的mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 (1)ADMA能促进单核细胞MCP-1的表达以及单核细胞转化为巨噬细胞的过程中LOX-1的表达，这种作用可被L-精氨酸所抑制。表明ADMA可直接促进单核细胞向巨噬细胞的转化。
　　 (2)ADMA在单核/巨噬细胞的转化过程中起重要作用，ADMA是一种新的心血管疾病危险因素。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前言

第二章 材料和方法

第三章 结果

第四章 讨论

第五章 结论

第六章 参考文献

附表 主要试剂配制

综述：ADMA在心血管疾病中起重要作用

致谢