干扰Hes1基因对骨髓基质细胞向胆碱能神经元分化前期的影响

摘要

第一部分 目的：本部分研究旨在通过对骨髓基质细胞的分离培养，观察其生物学特性，了解其增殖分化和体外培养获得大量扩增的条件，为进一步研究骨髓基质细胞的定向分化奠定基础。在体外环境下干扰骨髓基质细胞中Hes1基因的表达，检测Mash1基因的变化情况，探讨骨髓基质细胞体外培养条件下Hes1对Mash1的调控机制。
　　 方法：采用全骨髓培养法体外分离培养获得骨髓基质细胞，倒置显微镜下观察其形态变化，应用实时定量PCR 技术分析在干扰Hes1基因表达的情况下Mash1基因表达的变化。
　　 结果：经体外全骨髓分离培养的细胞贴壁能力强，细胞均一性好，呈旋涡状聚集，几乎都表达CD71。应用200nM，100nM，50nM，25nM 四种不同浓度梯度的siRNA干扰抑制Hes1基因，与对照组相比Hes1表达均降低。200nM 干扰后Hes1基因降低的程度是原来的0.036(P<0.05)，50nM 干扰后Hes1基因降低的程度是原来的0.076(P<0.05)，优于其他浓度的干扰效果。Hes1降低可使Mash1基因表达增加，且Hes1降低越显著，Mash1表达增加越高。
　　 结论：干扰Hes1基因对Mash1基因的表达有影响，且呈负相关调控关系。
　　 第二部分 目的：通过检测体外培养的骨髓基质细胞定向诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1基因对Sept-9，Stmn1基因的表达变化的分析，探讨影响骨髓基质细胞定向分化为胆碱能神经元的机制。
　　 方法：取体外培养的第三代的骨髓基质细胞，接种于多聚赖氨酸包被过的6孔培养板中，通过在培养基中添加诱导因子RA、SHH和bFGF，诱导其向胆碱能神经元分化。应用实时定量PCR 技术分析骨髓基质细胞向胆碱能神经元诱导分化的过程中干扰Hes1基因对Sept-9，Stmn1基因表达的影响。
　　 结果：Hes1经单纯诱导后表达增高；在干扰后诱导组中Hes1表达显著增高。用50nM的siRNA 干扰Hes1后Sept-9基因表达增高；单纯诱导分化P3的BMSCs后Sept-9基因表达情况与对照组相比无统计学意义；而干扰Hes1后诱导P3的BMSCs后Sept-9基因表达增高，且增高最显著。用50nM的siRNA 干扰Hes1后Stmn1基因表达显著增高；单纯诱导分化P3的BMSCs后Stmn1基因表达稍有增高；而干扰Hes1后诱导P3的BMSCs后Stmn1基因表达显增高，且其增高幅度介于干扰组与单纯诱导组之间。
　　 结论：Hes1表达的高低影响发育相关基因Sept-9，Stmn1的表达，并且发挥了重要的作用。

目录

论文说明：英文缩写词表

声明

前言

第一部分 干扰骨髓基质细胞Hes1 基因对Mash1 基因表达情况的影响

第二部分 骨髓基质细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1的表达对Mash1基因的影响

总结

综述 脊髓损伤微环境的研究进展

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