四种斑蝥素衍生物抗惊厥作用的药效学比较及胺甲氧斑蝥素的抗耐药机制研究

摘要

目的：比较胺甲氧斑蝥素（AMOC）、甲氧基去甲斑蝥素（NMOB）、甲基去甲斑蝥素（NMPB）、二甲基去甲斑蝥素（NDMB）的抗惊厥作用、毒性及其体存药效动力学。观察AMOC对青霉素慢性点燃耐丙戊酸钠大鼠模型的对抗作用及对耐药大鼠脑内mdr1mRNA及P-糖蛋白(Pgp)表达的影响，从基因和蛋白水平探讨AMOC抗耐药作用的机制。
　　 方法：（1）建立小鼠印防己毒素（PTX）惊厥模型，以NS为对照组，VPA为阳性对照，分析灌胃(ig)小鼠AMOC、NMOB、NMPB、NDMB的惊厥潜伏期、抗惊厥率。
　　 （2）建立最大电休克（MES）惊厥模型，以VPA为阳性对照，分析ig小鼠AMOC、NMOB、NMPB、NDMB的抗惊厥率、量效和时效关系，比较各药的抗惊厥效能；按Bliss法计算抗MES的ED50，比较其效价强度；(3)采用转轮法，分析ig小鼠AMOC、NMOB、NMPB、NDMB的CNS毒性作用，按Bliss法计算TD50，按公式LD50／ED50计算治疗指数（TI），比较各药的毒性；
　　 （4）采用药效法，运用数学模式模拟计算并比较各药在体内的体存药效动力学参数；
　　 （5）采用青霉素（PNC,3×106U?kg-1,ip)连续点燃13天的方法建立大鼠惊厥模型。灌胃惊厥大鼠丙戊酸钠（VPA，250mg?kg-1?d）21天，建立耐药模型。以惊厥潜伏期和Racine行为学分级作为评定药效指标，观察AMOC(175mg?kg-1、87.5mg?kg-1)、氟桂利嗪(FLU，87.5mg·kg-1，阳性对照) ig给药后的抗惊厥作用。采用RT-PCR技术，检测耐药惊厥大鼠脑内mdr1mRNA表达变化。免疫组化(SABC法)技术，检测脑内Pgp的蛋白表达变化。
　　 结果：（1）在抗PTX实验中， AMOC、NMOB、NMPB、NDMB及VPA均可延长惊厥潜伏期，与NS组比较均有统计学意义（p皆<0.05），可对抗PTX惊厥发作；其中AMOC、NMOB的抗惊率与VPA相同，NMPB和NDMB低于VPA。（2）VPA及AMOC、NMOB、NMPB、NDMB对MES模型均有对抗作用，量效呈正相关性，各药抗惊率分别为：VPA100％、AMOC100％、NMOB100％、NMPB 100％、NDMB90％；ED50值由小到大依次为VPAAMOC>NMPB＞NMOB>NDMB；TI由大到小依次为：VPA(55.9)、AMOC（11.5）、NMOB（8.4）、NMPB（8.1）、NDMB（6.1）；(4)药效动力学研究结果表明，各药的最小起效剂量由低到高为：VPA、AMOC、NMOB、NDMB、NMPB；达峰时间由快到慢为：AMOC、VPA、NMPB、NMOB、NDMB；AMOC的半效期达2.8小时左右，药效持续时间由长到短依次为VPA、AMOC、NDMB、NMOB、NMPB。
　　 五种药物中AMOC消除速率常数最小；(5)大鼠耐丙戊酸钠惊厥模型制备：40只大鼠，除正常对照鼠6只，造模过程中死亡一只被弃除外，其余33只大鼠连续13天经腹腔注射（ip）小剂量青霉素(PNC，3×106U?kg-1)后,出现6-8次以上Racine IV-V级痫性发作，确定点燃成功；33只惊厥大鼠除6只为惊厥模型对照组外，其余27只惊厥大鼠灌胃（ig）丙戊酸钠250mg?kg-1，每日1次，持续21天。最后一次给药24 h后应用阈下剂量PNC（3×106U?kg-1)进行动物筛选。耐丙戊酸钠组大鼠的惊厥潜伏期(26.11±7.80min)与惊厥模型对照组(19.26±10.55min)相比较差别无统计学意义(P>0.05)，且均出现Racine IV-V级发作，提示耐丙戊酸钠惊厥模型制备成功，模型成功率达100﹪；(6)灌胃两种剂量AMOC和FLU能使耐药大鼠痫性行为较耐药惊厥模型对照组减轻(P<0.01)，惊厥潜伏期延长(P<0.01)；(7) RT-PCR和免疫组化检测结果：正常对照组mdr1mRNA和Pgp表达量分别为0.83±0.09和1.83±1.72；惊厥模型组mdr1mRNA和Pgp表达量均较正常对照组增加，差异有统计学意义(P<0.05)；耐丙戊酸钠惊厥模型组mdr1mRNA和Pgp表达量均较惊厥模型组增高，且统计学上具有显著性差异(P<0.01)；AMOC大、小剂量组以及FLU阳性对照组mdr1mRNA和Pgp表达量均较耐药模型组降低，统计学上均有显著性差异(P＜0.01)；AMOC小剂量组mdr1mRNA和Pgp表达量均较大剂量组多，但两剂量组mdr1mRNA和Pgp表达量均比FLU组少。
　　 结论：（1）四种斑蝥素衍生物均可抗PTX惊厥发作，其中AMOC、NMOB抗惊厥效能较高。（2）四种斑蝥素衍生物均可剂量依赖性对抗MES发作，AMOC、NMOB、NMPB抗惊厥效能均较高，四种衍生物中AMOC效价强度最大；（3）AMOC的TD50比其他三种衍生物大，而小于VPA；（4）AMOC在四种药物中达峰时间最快、半效期和药效持续时间最长、消除最慢，最低起效剂量略大于VPA而小于其他三种衍生物。(5)灌胃两种剂量AMOC和FLU能使PNC点燃耐VPA大鼠痫性行为减轻，惊厥潜伏期延长，对耐丙戊酸钠惊厥大鼠惊厥发作有对抗作用；(6)两种剂量AMOC和FLU均能抑制耐药惊厥大鼠脑内mdr1mRNA和Pgp表达，且两者变化趋势一致, 说明两药抑制Pgp表达的直接原因是通过抑制mdr1mRNA表达实现的，AMOC作用性质与FLU相似，但AMOC的抗耐药作用较FLU强。

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前言

第一部分四种斑蝥素衍生物抗惊厥作用的药效学比较

第二部分AMOC 的抗耐药机制研究

结论

参考文献

综述Pgp抑制剂的研究进展

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