纳米羟基磷灰石-胶原-重组人骨形成蛋白-2复合支架的制备及细胞相容性

摘要

背景：
　　 利用骨组织工程学的理论，通过成骨细胞与支架共培养，测量细胞在材料上的增殖、分化情况，以此来评估生物支架材料的细胞相容性。
　　 目的：
　　 从细胞学角度评价复合材料纳米羟基磷灰石/胶原/重组人骨形成蛋白-2对成骨细胞增殖、分化的影响，了解其细胞相容性，并与同种异体骨比较，为该材料的临床应用提供实验依据。
　　 方法：
　　 采用改良胶原酶消化法处理新生24h内Wistar大鼠的颅盖骨，并进行成骨细胞原代培养。通过碱性磷酸酶染色、苏木精．伊红染色、钙结节茜素红染色、倒置相差显微镜对提取的成骨细胞进行观察与鉴定。然后将培养状况良好的第3代细胞与纳米羟基磷灰石/胶原/重组人骨形成蛋白-2支架材料体外复合培养。培养第3，6，9d后，采用倒置相差显微镜观察细胞形态，碱性磷酸酶活性测定法、MTT法测定支架材料对成骨细胞分化、增殖的影响。
　　 结果：
　　 1、通过原代培养提取的成骨细胞呈圆形悬浮于混合培养液中，2小时后开始逐渐贴壁。培养3天后，显微镜下可见细胞呈梭形及不规则形。碱性磷酸酶染色大部分细胞(95％以上)呈阳性，经茜素红染色可见红色矿化结节。
　　 2、ALP法和MTT法：该材料对成骨细胞增殖分化效果良好，并可促进成骨作用。
　　 3、倒置相差显微镜下见纳米羟基磷灰石/胶原/重组人骨形成蛋白-2复合材料周围聚集大量成骨细胞，并随时间增殖。
　　 4、扫描电镜观察发现：纳米羟基磷灰石/胶原/重组人骨形成蛋白-2复合支架表面有大量成骨细胞矿化结节，与对照组比较差异明显，进一步证实有利于骨形成。
　　 结论：
　　 纳米羟基磷灰石/胶原/重组人骨形成蛋白-2材料较同种异体骨材料对于成骨细胞的黏附、生长、分化、增殖效果更好，证明其具备良好的细胞相容性，有望为骨组织工程提供一种新的骨科修复材料。

目录

声明

缩略词简表

摘要

前言

实验 纳米羟基磷灰石-胶原-重组人骨形成蛋白-2复合支架的制备及细胞相容性

一 实验材料

二 实验方法

三 实验结果

四 讨论

全文总结

参考文献

综述

个人简历和研究成果

致谢