儿童乳牙根生理性吸收不同时期破牙细胞表达RANKL和TRAF6的研究

摘要

目的：①建立离体乳牙生理性吸收脱钙模型，为研究儿童乳牙根生理性吸收不同时期相关细胞因子的表达提供实验基础。②观察核因子(K)受体活化剂配体（receptor activator of nuclear factor kappa B ligand，RANKL）和肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factors 6，TRAF6)在儿童乳牙根生理性吸收过程中的表达，为进一步探索RANKL和TRAF6在儿童乳恒牙替换过程中的作用机理增添新的实验资料。
　　 方法：①收集儿童乳牙根生理性吸收期的乳前牙和因正畸拔除的前磨牙，按照牙根吸收分期标准分为吸收早期、吸收中期和吸收晚期三个实验组，因正畸拔除的前磨牙作为对照组，置于中性福尔马林溶液固定，然后将固定好的标本置于15％EDTA溶液，超声辅助脱钙，建立稳定的离体乳牙生理性吸收脱钙模型。②将脱钙成功后的标本，自牙根向牙冠沿牙体中线通过髓腔切5μm连续切片，运用免疫组织化学的方法检测儿童乳牙根生理性吸收过程中牙髓成纤维细胞，成牙本质细胞以及破牙细胞胞浆表达RANKL和TRAF6，然后使用医学图像分析系统对实验结果进行图像分析，运用SPSS17.0统计分析软件分别对实验组的成牙本质细胞，牙髓成纤维细胞和破牙细胞以及对照组的成牙本质细胞和牙髓成纤维细胞的光密度值进行one-wayANOVA检验，检验水准a=0.05，比较各组间组内差异。
　　 结果：免疫组织化学结果
　　 实验一：实验组：RANKL蛋白在儿童乳恒牙替换过程中破牙细胞、牙髓成纤维细胞和牙髓成牙本质细胞胞浆中染色阳性，吸收中期组累及光密度值高于吸收早期和吸收晚期组具有统计学差异。同组实验中破牙细胞与成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞累及光密度值比较P＜O.01具有统计学差异；而成牙本质细胞与牙髓成纤维细胞间累及光密度值比较P＞0.05，不具有统计学差异。对照组：成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞染色均为阴性，未观察到破牙细胞存在。
　　 实验二：实验组：连接蛋白TRAF6在儿童乳恒牙替换过程中破牙细胞、牙髓成纤维细胞和牙髓成牙本质细胞胞浆中染色阳性，吸收中期组TRAF6累及光密度值高于吸收早期和吸收晚期组具有统计学差异。同组实验中破牙细胞与成牙本质细胞，牙髓成纤维细胞累及光密度值比较P＜O.01具有统计学差异；而成牙本质细胞与牙髓成纤维细胞间累及光密度值比较P＞0.05.不具有统计学差异。对照组：成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞染色均为阴性，未观察到破牙细胞存在。
　　 结论：1.儿童乳牙根生理性吸收过程中破牙细胞表达RANKL免疫组织化学染色为阳性，推测RANKL可能通过自身调节参与自身的分化和功能活性，引起乳牙根的吸收。破牙细胞RANKL累及光密度值在乳牙根吸收中期组高于早期组和晚期组。提示RANKL在乳牙根吸收中期表达最强，破牙细胞功能最为活跃。2.儿童乳牙根吸收陷窝内破牙细胞表达TRAF6免疫组织化学染色为阳性，提示TRAF6可能参与该细胞的分化和功能活性，引起乳牙根的吸收。破牙细胞TRAF6累及光密度值在吸收中期组高于早期组和晚期组，提示TRAF6在乳牙根吸收中期表达最强，破牙细胞最为活跃。3.通过免疫组织化学发现实验组破牙细胞TRAF6累及光密度值在牙根吸收早期、吸收中期和吸收晚期的强度变化与RANKL一致，吸收中期出现光密度值最高。推测在儿童乳牙根生理性吸收中期破牙细胞数量最多，功能最强，RANKL-RANK-TRAF6轴介导破牙细胞的分化成熟。

目录

声明

缩略词简表

摘要

前言

实验一 儿童乳牙根生理性吸收不同时期破牙细胞表达RANKL的研究

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

实验二 儿童乳牙根生理性吸收不同时期破牙细胞表达TRAF6的研究

一、实验材料

三、实验结果

四、讨论

全文总结

参考文献

综述

附图

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