二甲双胍对缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞凋亡的影响

摘要

目的:通过培养SD大鼠乳鼠心肌细胞，建立缺氧/复氧(H/R)损伤模型，观察二甲双胍(metformin，Met)对H/R导致的乳鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法:选用出生1-3天的SD乳鼠，采用胰蛋白酶和胶原酶消化法分离和原代培养乳鼠心肌细胞，a肌动蛋白免疫荧光法对心肌细胞进行鉴定。培养72小时后，当乳鼠心肌细胞融合达80％以上时分为四组:空白对照组、二甲双胍组（二甲双胍处理心肌细胞12h）、缺氧/复氧组（将心肌细胞进行缺氧/复氧处理）、二甲双胍+缺氧/复氧组（二甲双胍预先处理心肌细胞12h再进行缺氧/复氧）。倒置荧光显微镜下观察各组心肌细胞的形态结构及生长状态情况;FCM术检测各组细胞的凋亡率;RT-PCR检测各组细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的mRNA表达情况;ELISA检测各组细胞胞浆内细胞色素C(Cytc)的含量。 结果: (1)各组心肌细胞生长状态的比较:空白对照组和二甲双胍组心肌细胞的生长状态好，细胞生长密集、折光性强、搏动明显。缺氧/复氧组细胞生长状态差，细胞自发搏动明显减慢。而二甲双胍+缺氧/复氧组多数细胞结构接近正常，生长状态好，搏动频率较快。 (2) FCM术检测结果显示:与空白对照组比较，二甲双胍组的细胞凋亡率基本无变化;而缺氧/复氧组的细胞凋亡率明显增加，差异显著(P＜0.05)。给予二甲双胍预先处理后，心肌细胞的凋亡率较缺氧/复氧组明显降低(P＜0.05)。 (3) RT-PCR检测结果显示:与空白对照组比较，二甲双胍组细胞的caspase-3mRNA表达水平基本无变化;而缺氧/复氧组细胞的caspase-3mRNA表达水平明显增加，差异显著(P＜0.05)。给予二甲双胍预先处理后，心肌细胞的caspase-3mRNA表达水平较缺氧/复氧组明显降低(P＜0.05)。 (4) ELISA法检测结果显示:与空白对照组比较，二甲双胍组细胞胞浆内Cytc的含量基本无变化;而缺氧/复氧组细胞胞浆内Cytc的含量明显增加，差异显著(P＜0.05)。给予二甲双胍预先处理后，心肌细胞胞浆内Cytc的含量较缺氧/复氧组明显降低(P＜0.05)。 结论: (1)缺氧/复氧后乳鼠心肌细胞凋亡明显增加，二甲双胍可以减轻缺氧/复氧导致的心肌细胞凋亡。 (2)二甲双胍可能通过减少缺氧/复氧后细胞胞浆内Cytc的含量进而抑制caspase-3mRNA的表达而减轻缺氧/复氧导致的心肌细胞凋亡。

目录

声明

缩略语表(Abbreviations)

摘要

前言

材料和方法

1．1 材料

1．2 实验方法

实验结果

2．1 原代心肌细胞的形态特征及鉴定结果

2．2 各组心肌细胞形态学比较

2．3 FCM术检测各组心肌细胞凋亡率

2．4 RT-PCR检测心肌细胞caspase-3mRNA的表达结果

2．5 ELISA法检测心肌细胞内cyt C的含量

讨论

结论

参考文献

附图

综述 二甲双胍的心血管保护作用

致谢

个人简历