左旋氨氯地平对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖及CaN的影响

摘要

目的: 观察自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞形态及增殖;检测SHR血管平滑肌细胞中钙调磷酸酶(CaN)的活性;观察钙拮抗剂左旋氨氯地平干预对SHR血管平滑肌细胞增殖的抑制作用，探讨其与CaN的关系。 方法: 自发性高血压大鼠，雄性，周龄9周，体重质量190-210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，测量大鼠尾巴根部血压示:收缩压170±12mmHg，舒张压98±7mmHg。无菌获取鼠主动脉，中膜制备，传代培养，实验分组:正常对照组（C组）、自发性高血压模型组（N组），药物组:左旋氨氯地平低剂量组0.1 umol/L(L组)，中剂量组1.0umol/L(M组)，高剂量组10.0 umol/L(H组)，采用免疫组化法鉴定VSMC，采用倒置相差显微镜观察VSMC形态、检测细胞成活率并绘制第2代细胞生长曲线，MTT法测各组VSMC增殖，ELISA法测定CaN活性的表达，数据分析用SPSS16.0统计软件处理。 结果: 1.免疫组化法鉴定VSMC:细胞的胞质或包膜出现浅黄色至深棕色染色颗粒，且排除背景非特异性染色，证明是血管平滑肌细胞。 2.倒置相差显微镜观察VSMC形态、绘制第2代生长曲线并用台盼蓝染色法检测细胞成活率:光镜观察原代第3天左右即可见数个组织块周围出现细胞晕，第5-7天后，细胞分裂增殖进入对数生长期，第8天后，在组织块附近首次出现血管平滑肌细胞特征性的“谷-峰”结构;细胞成活率检测:存活细胞均在96％以上，表明培养的细胞传代成活率高;绘制生长曲线:细胞呈现“潜伏期-对数生长期-停滞期”的生长模式。 3.MTT法测各组VSMC增殖及左旋氨氯地平干预对其的影响:对模型组与对照组重复测量数据进行球形检验，检验结果P＜0.05，拒绝球形检验，需要ε校正系数来校正自由度，结果参照Greenhouse-Geisser。Greenhouse-Geisser结果显示:各个时间之间比较F=7.387，P=0.000，说明随时间的延长，细胞一直在增多;由轮廓图可见:到C组第6天，N组第5天细胞增殖达到最高值;C组与N组之间比较:F=3.678，P=0.000，表明两组之间细胞增殖趋势不同，对照组中VSMC的增殖较模型组呈缓慢增长趋势，说明模型组的增殖效果优于对照组;处理组与时间的交互作用:F=4.534，P=0.000，高血压与时间之间存在交互作用，说明它们共同影响细胞的增殖，高剂量的左旋氨氯地平对SHR的VSMC异常增殖的抑制作用明显（P＜0.05）。 4.ELISA法测定CaN活性的变化及左旋氨氯地平干预对其影响:N组CaN活性明显高于C组(5.22±0.34vs2.81±0.18，P＜0.05)，表明SHR的CaN活性升高;H组CaN活性明显低于N组（3.98±0.13vs5.22±0.34，P＜0.05），表明高剂量的左旋氨氯地平在一定程度上能够降低SHR的CaN活性。 结论: 1.自发性高血压大鼠中CaN活性升高提示该酶参与血管平滑肌细胞增殖。 2.左旋氨氯地平通过降低CaN的活性，参与抑制血管平滑肌细胞增殖。

目录

声明

摘要

第一部分 前言

第二部分 材料与方法

1 材料与试剂

2．实验方法

第三部分 结果

3．1 免疫组化结果

3．2 倒置相差显微镜观察VSMC形态，细胞成活率检测及绘制生长曲线

3．3 MTT法测各组VSMC增殖结果

4．4 ELISA法测定CaN活性的表达

第四部分 讨论

第五部分 结论

参考文献

综述 钙调磷酸酶调控效应及信号转导机制与疾病研究进展

附录

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