瑞舒伐他汀联合氯沙坦对OX--LDL诱导人单核巨噬细胞肝X受体表达的影响

摘要

目的: 本实验中主要探讨瑞舒伐他汀、氯沙坦两药联合对OX-LDL诱导的人单核-巨噬细胞肝X受体基因表达的影响及可能的机制。 方法: 采用体外密度梯度离心法分离并培养单核细胞，传至第3代，以佛波脂(120nmol/L)将单核细胞转化为巨噬细胞，培养48小时后用于实验。据实验要求设置空白对照组、OX-LDL模型对照组(OX-LDL50ug/ml诱导后单独培养48h)、氯沙坦组(加入OX-LDL50ug/ml培养2h，在此基础上分别加入氯沙坦10 umol/l，50 umol/l，100 umol/l孵育48h)、瑞舒伐他汀组（加入OX-LDL50ug/ml培养2h，在此基础上分别加入瑞舒伐他汀0.1umol/l，1.0umol/l，5umol/l孵育48h)、瑞舒伐他汀联合氯沙坦组（加入OX-LDL50ug/ml培养2h，在此基础上加入最适剂量瑞舒伐他汀联合最适剂量氯沙坦5+100 umol/l共同作用48h），分别提取各组细胞RNA，用RT-PCR法测定肝X受体的mRNA的表达，Westernblotting法测定肝X受体蛋白表达水平。 结果: 1.人静脉血经分离后培养出的悬浮单核细胞，再经佛波酯诱导后，成功转化为不规则多边形贴壁生长的巨噬细胞见图1、2，流式细胞术鉴定90％以上单核细胞已转化为巨噬细胞。 2.油红O染色结果显示:镜下观察细胞形态饱满，边界清晰，排列紧密，可见胞质内被染为橙红色的脂滴。见图3、4。 3.巨噬细胞肝X受体mRNA的变化:与空白对照组比较，OX-LDL诱导的模型对照组LXRmRNA表达水平明显降低(P＜0.05);氯沙坦组与OX-LDL模型对照组比较，LXRmRNA表达水平显著增高(P＜0.05);瑞舒伐他汀组与OX-LDL模型对照组比较，LXRmRNA水平显著增高(P＜0.05);瑞舒伐他汀联合氯沙坦组与OX-LDL模型对照组比较，LXRmRNA水平显著增高(P＜0.05)，并且高于单药组(P＜0.05)。 4.巨噬细胞肝X受体蛋白表达的变化:OX-LDL模型对照组的肝X受体在蛋白水平上较空白对照组明显降低(P＜0.05);氯沙坦组与OX-LDL模型对照组比较，肝X受体蛋白表达水平显著增高(P＜0.05);瑞舒伐他汀组与OX-LDL模型对照组比较，肝X受体蛋白表达水平显著增高(P＜0.05);瑞舒伐他汀联合氯沙坦组与OX-LDL模型对照组比较，肝X受体蛋白表达水平显著增高(P＜0.05)，并且高于单药组(P＜0.05)。 结论： 瑞舒伐他汀、氯沙坦均可上调LXR的表达从而增强胆固醇外流，而瑞舒伐他汀与氯沙坦以适宜剂量联合后，LXR的表达增高比单独用药更为显著。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1．1 细胞来源

1．2 主要试剂与仪器

1．3 主要试剂的配置

1．4 细胞分离、培养及鉴定

1．5 实验分组

1．6 油红O染色鉴定泡沫细胞

1．7 Real Time PCR法检测LXRmRNA的表达

1．8 Western blotting测定LXR蛋白表达水平

1．9 统计学处理

结果

2．1 流式细胞术鉴定单核源性巨噬细胞

2．2 泡沫细胞模型建立与鉴定

2．3 逆转录聚合酶链反应检产物的确定分析

2．5 氯沙坦、瑞舒伐他汀单用对肝X受体蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

附图

综述 肝X受体与动脉粥样硬化

个人简介

致谢