1,25(OH)2D3对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞IL-22介导的破骨细胞形成可能机制的研究

摘要

背景：类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种常见的慢性自身免疫性疾病，主要表现为滑膜炎和不可逆骨破坏。破骨细胞是参与RA关节破坏的主要细胞，而RANKL的分泌增加是破骨细胞分化的必要条件。1,25(OH)2D3是人体内的活性维生素D，在调节机体免疫功能、影响骨代谢方面发挥着重要作用。而RA患者中普遍存在着1,25(OH)2D3的缺乏。RA滑膜表达的IL-22具有促炎和骨质破坏作用，IL-22的可通过JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB信号通路，促进RANKL的表达，进而影响破骨细胞的形成。我们前期研究发现1,25(OH)2D3可降低RA中IL-22的水平，并且呈剂量依赖性的下调RANKL的表达。于是我们推测1,25(OH)2D3可能通过阻断“IL-22→JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB”信号途径，抑制RA破骨细胞的形成。
　　目的：⑴研究1,25(OH)2D3在RA中的作用；⑵研究1,25(OH)2D3是否通过阻断“IL-22→JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB”信号途径，抑制RA患者破骨细胞的形成。
　　方法：①回顾性分析1,25(OH)2D3在RA中的作用；②从RA患者的滑膜组织中分离培养FLS至4-6代，从健康志愿者外周血中分离MN（单核细胞），均加入M-CSF（25ng/mL）预处理；3d后，将两者共培养，同时按分组加入RANKL（30ng/mL），M-CSF（25ng/mL），IL-22（10ng/mL），1,25(OH)2D3（1nM），信号转导蛋白抑制剂等药物，分为以下五组：a组：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+IL-22； b组：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+I L-22+PD9805（MEK-1通路抑制剂）；c组：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+I L-22+parthenolid（NF-κB抑制剂）；d组：MN+M-CSF+RA-FLS；e组：MN+M-C SF+RA-FLS+RANKL。在共培养14天后处理，固定玻片上细胞并行TRAP染色，观察破骨细胞生成的情况；用Real-time PCR检测所加药物对破骨细胞表面的标志物TRAP、组织蛋白酶K、基质金属蛋白酶（MMP）-9 mRNA的表达的影响。③数据分析采用SPSS17.0软件。
　　结果：⑴RA组血清水平低于健康对照组，差异有统计学意义[(15.67±7.27ng/ml与(20.08±7.14)ng/ml，t=-3.87，P＜0.05]。⑵血清25-羟维生素D水平与BMI、DAS28评分、ESR、CRP呈负相关（r=-0.735、-0.539、-0.343、-0.539，P均＜0.01）；血清25-羟维生素D水平与Ts细胞呈正相关（r=0.636，P＜0.01）。⑶根据病情活动度（DAS28评分）分组后，病情高活动组（DAS28＞5.1）血清25-羟维生素D水平[(13.83±8.42)ng/ml]与ESR[(73.17±31.21)mm/h]呈负相关（r=-0.381,P＜0.01）；血清25-羟维生素D水平[(13.83±8.42)ng/ml]与DAS28评分[(6.80±1.11)mm/h]呈负相关（r=-0.567,P＜0.01）。3组间血清25-羟维生素D水平比较差异有统计学意义（F=132.839，P＜0.01）。⑷根据不同BMI水平分组后，在超重组（BMI≥24 kg/m2），25-羟维生素D水平与ESR呈负相关（r=-0.395, P＜0.05）；在肥胖组（BMI≥28 kg/m2），25-羟维生素D水平与ESR呈负相关（r=-0.385, P＜0.05）。3组间血清25-羟维生素D水平比较差异有统计学意义（F=31.41，P＜0.01）。⑸在抗-CCP阳性组，25-羟维生素D水平与DAS28评分呈负相关（r=-0.464,P＜0.01）。抗-CCP阳性组25-羟维生素D水平低于抗CCP阴性组，差异有统计学意义（t=-3.08，P＜0.01）。⑹实验组中，b组和c组分别加入不同的通路抑制剂。b组与a组相比目的基因表达相对增加，且差异有统计学意义（P<0.05）；c组和a组相比目的基因表达相对增加，且差异有统计学意义（P<0.05）。⑺对照组中，阳性对照组d组目的基因表达量比阴性对照组e组目的基因表达量相对增加，且差异有统计学意义（P<0.05）。⑻在加入通路抑制剂实验组，b组（加入MEK-1抑制剂PD98059）与c组（加入 NF-κB抑制剂 parthenolide）目的基因相对表达量差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：①1,25(OH)2D3与RA相关密切，在RA的发生、发展中可能具有一定作用；②1,25(OH)2D3能够阻断IL-22介导的JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB通路进而抑制RA破骨细胞的生成。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

第一章 类风湿关节炎患者25-羟维生素D水平与临床指标相关性研究

1 研究对象和方法

2 结果

讨论

小结

第二章 1,25(OH)2D3对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞IL-22介导的破骨细胞形成可能机制的研究

1 材料与方法

结果

讨论

小结

结论

参考文献

综述:破骨细胞形成相关因素在类风湿关节炎骨破坏中的作用

致谢

个人简历