miR155/miR146a/miR31和STAT6/NF-κB/FOXP3在大气PM2.5诱导大鼠哮喘加重中的作用

摘要

目的：
　　探讨PM2.5是否改变哮喘大鼠的miR155、miR146a、miR31和STAT6、NF-κB、FOXP3转录因子的表达，及细胞因子IL-13、IL-8、IL-10的表达的改变，为PM2.5加重哮喘的发病机制提供科学依据。
　　方法：
　　将45只雄性SD大鼠随机分为5组，分别为对照组、哮喘组、哮喘+PM2.5低剂量组、哮喘+PM2.5中剂量组、哮喘+PM2.5高剂量组，通过腹腔注射及雾化吸入卵清蛋白(OVA)致敏，激发建立大鼠哮喘模型，第25、28、31、34天予以不同剂量PM2.5气管滴注染毒。第36天处死大鼠后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并进行BALF中细胞总数及分类计数，分析大鼠体重及各脏器系数的改变，观察肺脏HE染色的病理变化。RT-PCR检测大鼠肺组织中miR155、miR146a、miR31、STAT6基因、NF-κB基因、FOXP3基因、IL-13基因、IL-10基因的表达，Western-blot检测肺组织p-STAT6蛋白、NF-κB蛋白、FOXP3蛋白的表达，ELISA检测BALF中IL-13、IL-8、IL-10的含量。并分析miRNA、转录因子、细胞因子间的相关性。
　　结果：
　　1.哮喘组左肺脏器系数、细胞总数、嗜酸粒细胞比例、中性粒及淋巴细胞比例均高于对照组，哮喘+ PM2.5低、中、高剂量组嗜酸粒细胞比例、中性粒及淋巴细胞比例均高于哮喘组(P<0.05)。
　　2.哮喘组miR146a的表达高于对照组，哮喘+PM2.5中、高剂量组中miR155、NF-κB基因及BALF中IL-8的表达量和哮喘+PM2.5高剂量组中miR146a、STAT6基因表达量高于哮喘组，哮喘+PM2.5高剂量组miR155、STAT6基因及BALF中IL-8的表达量高于哮喘+PM2.5低剂量组(P<0.05)。
　　3.哮喘组FOXP3基因、IL-10基因及FOXP3蛋白表达量低于对照组，哮喘+PM2.5中、高剂量组 miR31及 FOXP3基因蛋白表达量低于哮喘组，哮喘+PM2.5高剂量组FOXP3蛋白的表达低于哮喘+PM2.5低剂量组(P<0.05)。
　　4.大鼠肺组织miR155的表达与STAT6、IL-13基因蛋白的表达相关，大鼠肺组织miR146a的表达与NF-κB基因蛋白、IL-8蛋白的表达相关，大鼠肺组织miR31的表达与FOXP3、IL-10基因蛋白的表达相关(P<0.05)。
　　结论：
　　PM2.5可能改变哮喘大鼠miR155、miR146a、miR31等miRNA的表达， STAT6、NF-κB、FOXP3等核转录因子的表达，及细胞因子IL-13、1L-8、IL-10的表达改变，从而诱导大鼠哮喘的加重。

目录

声明

常用缩略词中英文对照表

前言

技术路线

第一部分 PM2.5染毒的大鼠哮喘模型的制备

1 材料与方法

1.1 动物

1.2 主要试剂和仪器

1.3 试剂的配制

1.4 PM2.5的采集和收集

1.5 动物的分组

1.6 哮喘模型的制备及染毒

1.7 肺泡灌洗液中细胞分类计数

1.8 标本的收集及病理切片的观察

1.9 数据整理和统计分析

2 结 果

2.1 大鼠的一般观察

2.2 大鼠体重的变化

2.3 大鼠各脏器系数改变

2.4 大鼠肺组织病理变化

2.5 大鼠BALF中细胞总数及分类计数

3 讨 论

第二部分 miR155/miR146a/miR31和STAT6/NF-κB/FOXP3在大气PM2.5诱导大鼠哮喘加重中的作用

1 材料与方法

1.1 动物

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器和器材

1.4 试剂的配制

1.5 miR155、miR146a、miR31表达的测定

1.6 NF-κB、STAT6、FOXP3、IL-10、IL-13基因表达的测定

1.7 Western Blot方法检测NF-κB、P-STAT6、FOXP3蛋白表达的检测

1.8 ELISA法检测BALF中IL-8、IL-10、IL-13的表达

2 结 果

2.1 肺组织miR155、miR146a、miR31表达的变化

2.2 肺组织STAT6、NF-κB、FOXP3基因表达的变化

2.3 肺组织中三种核转录因子蛋白表达的变化

2.4 肺组织中IL-13、IL-10基因表达的变化

2.5 BALF中IL-13、IL-8、IL-10含量的变化

2.6 miRNA、转录因子、细胞因子间的相关性分析

3 讨 论

3.1 miR155、miR146a、miR31在PM2.5引起大鼠哮喘加重的变化

3.2 STAT6、NF-κB、FOXP3在PM2.5引起大鼠哮喘加重的变化

3.3 miR155/STAT6/IL-13、miR146a/NF-κB/IL-8及miR31/FOXP3/IL-10在PM2.5引起哮喘加重中的调节作用

4 结 论

参考文献

综述:颗粒物及miRNA与哮喘的关系

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