北柴胡试管植株生长发育及柴胡皂苷含量分析

摘要

柴胡为伞形科柴胡属植物，是我国的传统常用大宗中药材。北柴胡（Bupleurumchinense DC.）是《中华人民共和国药典》收录的柴胡正品药材的原植物，其以根入药，具有和解退热、消炎、抗病毒、保护肝细胞、提高机体免疫力等功效。近年来，“回归自然”的热潮席卷全球，柴胡药材新的药用、保健及美容功能不断被开发出来，市场对商品药材的需求大幅增加。然而，由于多年的滥采滥挖和无序利用，柴胡的野生资源遭到严重破坏，药材供应主要以人工种植品为主。生产中普遍存在的种源混杂、种子萌发率低、适合各地气候条件的当地品种匮乏等问题严重制约了柴胡药材产业的发展。山西省是野生柴胡资源的主要分布区及家种柴胡的主要生产区之一，植物组织培养技术是药用植物优良品种选育和优良种质快速繁殖的有效手段。
　　本文以采自山西省十三个主要种植、分布县（市）的16种栽培和野生北柴胡及其试管植株为研究对象，通过观察各类型北柴胡试管植株生长势的异同，比较不同外源植物激素和不同培养基对试管植株快速繁殖的作用，分析北柴胡试管植株和种子植株中皂苷含量的动态变化，测定野生及栽培北柴胡柴胡的皂苷含量，为北柴胡大规模快速繁殖及优良种质资源的选育提供了科学依据。对生长势的观察及统计结果表明，继代培养的北柴胡试管植株大多数性状都与相同类型的野生或栽培植株相同或相近，在不同种类之间存在差异，大部分试管植株的遗传稳定性得以保持。对外源植物激素在北柴胡试管植株生长发育中的作用的研究结果表明，6-BA、KT、NAA、IBA和DSC等在一定浓度范围内对试管植株的生长均呈正相关，高于一定值后则表现为对试管植株生长的抑制。1.5 mg/L的6-BA和0.8 mg/L的KT对产自陵川六泉的试管植株生长有良好的促进作用。NAA、IBA和DSC对诱导试管植株生根作用明显，在1/2 MS+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA+1.5 mg/L DSC的培养基中，产自芮城的试管植株的根及茎叶生长状况良好，综合性状优良。
　　本研究通过对快速繁殖培养基的优化与筛选，我们发现Ag+对于试管植株生长的促进作用存在正负两种效应，1.4mg/L的浓度对产自陵川六泉的北柴胡试管植株的生长有良好的促进作用。在试管植株的继代培养和生根培养中，分别在培养基中添加3％和5％的蔗糖是适宜的。较之于固体培养，通过液体培养所得到的试管植株株型大、茎直且粗、芽多。对试管植株及种子植株中皂苷含量的动态分析结果表明，试管植株的皂苷含量主要在生根后3～6个月间累积;大田中的一年生种子植株在当年4月开始生长后皂苷逐渐累积，至11月2日霜降节气时含量有所降低;移栽试管植株在大田中表现出优良的性状，直到11月14日立冬节气时仍在合成皂苷。以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d及总皂苷等因素综合考查，在十六种野生及栽培北柴胡中综合优势明显的分别是产自山西阳曲、稷山、万荣、陵川六泉、左权、夏县等地的北柴胡类型。

目录

摘要

英文缩略词表

1 综述

1．1 我国中药资源概况

1．1．1 中药现代化发展的进程

1．1．2 我国中药资源面临的问题

1．1．3 中药资源的可持续发展与合理利用

1．2 北柴胡研究现状

1．2．1 药理药化研究

1．2．2 柴胡药剂、药方研究

1．2．3 人工栽培研究

1．2．4 组织培养研究

2 北柴胡试管植株生长势比较

2．1 材料与仪器

2．1．1 材料

2．1．2 仪器

2．2 方法

2．2．1 不同类型北柴胡茎叶生长势的观察与比较

2．2．2 不同类型北柴胡根生长势的观察与比较

2．2．3 数据统计

2．2．4 数据的分析处理

2．3 结果与分析

2．3．1 株高的比较

2．3．2 主直径的比较

2．3．3 有效叶片的比较

2．3．4 最大叶长度比较

2．3．5 最大叶片宽度比较

2．3．6 根长度比较

2．4 结论

3 不同外源植物激素对北柴胡试管植株生长发育的影响

3．1 材料与仪器

3．1．1 材料来源

3．1．2 实验仪器及试剂

3．2 方法

3．2．1 B5培养基以及6-BA和KT浓度、配比的选择

3．2．2 MS培养基以及NAA、IBA和DSC的选择

3．3 结果与分析

3．3．1 6-BA和KT对山西陵川六泉北柴胡生长的影响

3．3．2 NAA、IBA及DSC对山西芮城北柴胡诱导生根的影响

3．4 结论

4 北柴胡快速繁殖培养基的优化与筛选

4．1 材料与仪器

4．1．1 材料来源

4．1．2 仪器

4．2 方法

4．2．1 在B5培养基中添加不同浓度的AgNO3

4．2．2 在B5培养基中添加不同浓度的蔗糖

4．2．3 在MS生根培养基中添加不同浓度的蔗糖

4．2．4 液体培养

4．3 结果与分析

4．3．1 不同浓度AgNO3对山西陵川六泉北柴胡试管植株生长的影响

4．3．2 不同浓度蔗糖对北柴胡试管植株生长的影响

4．3．3 液体培养

4．4 结论

5 北柴胡试管植株及种子植株中皂苷含量的动态分析

5．1 仪器及试剂

5．1．1 材料来源

5．1．2 实验仪器及试剂

5．2 方法

5．2．1 试管植株根茎叶的采集与柴胡皂苷含量测定

5．2．2 种子植株根茎叶的采集与柴胡皂苷含量测定

5．3 结果与分析

5．3．1 试管植株根中的柴胡皂苷含量动态分析

5．3．2 种子植株根及茎叶中的柴胡皂苷含量动态分析

5．3．3 移栽试管植株根及茎叶中的皂苷含量动态分析

5．4 结论

6 十六种晋产野生及栽培北柴胡中皂苷类物质含量比较

6．1 仪器及试剂

6．1．1 材料来源

6．1．2 实验仪器及试剂

6．2 方法

6．2．1 HPLC法测定柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量

6．2．2 分光光度法测定柴胡总皂苷含量

6．3 结果与分析

6．3．1 根中的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量

6．3．2 根中的柴胡总皂苷含量

6．4 结论

参考文献

图版说明

图版Ⅰ

图版Ⅱ

图版Ⅲ

致谢

个人简历

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