蚊媒拟除虫菊酯类杀虫剂抗性现场分子检测方法的研究

摘要

媒介昆虫引起的传染病（虫媒病）一直以来都是危害人类健康的公共卫生问题。尤其在我国大部分地区植被丰富，气候适宜，媒介种群密度高且种类繁多，且由于经济的快速发展，流动人口不断增加，部分虫媒病有随时爆发流行的可能。因此，虫媒病的威胁逐渐增强，进一步加强媒介防制研究是应对公共卫生突发事件的重要举措。化学防治一直是防制媒介蚊虫的主要方法。拟除虫菊酯类杀虫剂的应用范围最广的杀虫剂，同时，拟除虫菊酯类杀虫剂也是当今世界抗药性最严重的一类杀虫剂。因此，媒介蚊虫抗药性已成为全世界范围内蚊虫媒介传播疾病防治中的突出问题。
　　 目的:了解山东省不同地区的淡色库蚊成蚊对溴氰菊酯的抗药性水平及其kdr等位基因的突变与抗药性水平间的关联情况，并探索建立蚊虫抗药性的现场检测方法，对山东省蚊传疾病影流行影响的研究提供科学依据。
　　 方法:采用PCR和AS-PCR技术，使用特异性引物克隆不同地区野生淡色库蚊成蚊kdr基因序列，并进行基因测序。利用线性回归分析判断其突变情况与抗药性的关联情况。
　　 结果:成功克隆出淡色库蚊成蚊的RNA、DNA和kdr等位基因，通过基因序列分析发现在淡色库蚊钠通道第Ⅱ结构域S6节段1014位点上存在2种突变，即L1014S:TTA突变成为TCA，于是相应的亮氨酸(L)被丝氨酸(S)取代，L1014F:TTA突变成为TTT，同样相应的亮氨酸(L)被苯丙氨酸(F)取代。Kdr基因L1014F突变和L1014S突变与淡色库蚊成蚊对溴氰菊酯的抗性表型皆表现为正性相关。蚊虫抗药性基因序列分析检测的结果显示出PCR技术优于AS-PCR技术。
　　 结论:淡色库蚊kdr基因突变与溴氰菊酯抗药性表型呈正相关，PCR和AS-PCR技术都可以应用于蚊虫抗药性的大规模的现场检测，但是PCR技术准确性AS-PCR技术。

目录

声明

摘要

主要符号表

前言

第一章 淡色库蚊与kdr相关的钠离子通道基因突变的研究

一、材料和方法

(一)、实验材料

(二)、实验方法

二、实验结果

1．淡色库蚊自然种群抗性检测

2．淡色库蚊kdr相关钠离子通道cDNA片段扩增

3．单蚊基因组DNA提取

第二章 淡色库蚊自然种群与kdr相关钠离子通道基因多态性与进化的研究

一、材料和方法

(一)、实验材料

(二)、实验方法

二、实验结果

1．淡色库蚊自然种群抗性检测

2．淡色库蚊自然种群kdr基因型检测

3．淡色库蚊自然种群kdr等位基因频率分布及其与抗性水平关系分析

第三章 用AS-PCR法现场检测淡色库蚊抗药性的研究

一、材料和方法

(一)、实验材料

(二)、实验方法

二、实验结果

2．1 成蚊基因组DNA提取

2．2 kdr基因AS-PCR扩增

三、讨论

结论

参考文献

综述 蚊虫抗药性分子机理研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢