大鼠运动应激性胃溃疡模型的建立以及苦苣总黄酮的预防作用

摘要

过度运动是一种特殊的生理病理过程，同时也是一种强烈的应激原。剧烈运动可使机体产生一系列的应激反应，其中胃肠道、神经、内分泌系统等均可出现不同的症状或体征。尤其是长跑或马拉松运动员，运动期间会出现胃出血、腹泻或肠胃综合征，从而影响了正常训练和比赛的进行。为此，过度运动诱发运动性胃肠综合征尤其是应激性胃黏膜损伤的医学问题已成为体育界日益关注的热点。本研究拟建立快速、稳定、可重复的大鼠运动应激性胃溃疡模型，研究苦苣提取物3.2g/kg(按生药计)和1.6g/kg对运动应激性胃溃疡大鼠血清和胃组织中NF-κB、TNF-α、脑肠肽、脑钠素、SOD和MDA的变化情况，以探讨苦苣提取物对运动应激性胃溃疡的预防作用机制，为防治运动应激性胃溃疡的发生和康复治疗提供实验理论依据。
　　研究方法：
　　100只Wistar大鼠随机分为安静对照组、1h无负荷运动组、1h负荷运动组、2h无负荷运动组和2h负荷运动组，每组20只，雌雄各半。采用游泳方式建立大鼠运动应激性胃溃疡模型，观察胃黏膜溃疡损伤指数（UI）和病理学改变。40只雄性Wistar大鼠随机分空白对照组、1 h负荷运动模型组、大剂量苦苣总黄酮组（生药3.2 g/kg）和小剂量苦苣总黄酮组（生药1.6 g/kg），观察胃黏膜病理学改变，检测胃黏膜中超氧化物歧化酶（SOD）活性以及胃黏膜和血清丙二醛（MDA）含量。观察大鼠胃溃疡指数（UI）。免疫组织化学法和Western-blotting法检测胃组织中 NF-κB、TNF-α蛋白表达量，利用RT-PCR法检测胃组织中NF-κB mRNA、TNF-α mRNA的表达量，利用ELISA法检测大鼠血清和胃组织中脑肠肽和脑钠素的含量。
　　结果：
　　1.运动应激性胃溃疡模型建立
　　(1)不同负荷和不同游泳时间对大鼠胃黏膜损伤的影响：安静对照组未见胃黏膜损伤的发生，其余四组UI均较安静对照组显著升高(P<0.01)。与1h负荷运动组相比，1h无负荷运动组UI显著降低(P<0.01)，2h无负荷运动组无明显差异(P>0.05)，2h负荷运动组显著升高(P<0.01)；2h无负荷运动组与2h负荷运动组UI无明显差异（P>0.05)。
　　(2)不同性别对大鼠胃黏膜损伤的影响：四个运动组雄性大鼠胃溃疡指数均高于雌性大鼠。
　　(3)胃组织病理学结果：大鼠胃黏膜损伤程度依次为2h负荷运动组＞2h无负荷运动组＞1h负荷运动组＞1h无负荷运动组。
　　2.苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡的预防作用
　　(1)各组胃黏膜损伤结果空白对照组未发现胃溃疡发生，其余各组UI均较空白对照组显著增加（P<0.01）；与运动模型组比较，小剂量、大剂量苦苣总黄酮组大鼠的UI均显著降低（P<0.05和P<0.01）。
　　(2)苦苣总黄酮对大鼠血清和胃组织中SOD活性及MDA含量的影响与空白对照组比较，运动模型组大鼠胃组织SOD活性明显降低（P<0.01），胃组织和血清MDA含量显著增加（P<0.05）。与运动模型组比较，苦苣总黄酮大剂量组大鼠胃组织中SOD活性显著升高（P<0.05），胃组织和血清MDA含量显著降低（P<0.05），而小剂量组上述三个指标无明显差异。
　　(3)胃组织病理学结果检查空白对照组胃黏膜为单层柱状上皮，固有层结缔组织中充满胃底腺，未见上皮细胞变性、坏死；运动模型组胃黏膜深层上皮细胞变性、坏死，局部表层大面积出血，余未见异常；苦苣总黄酮大剂量组胃黏膜浅层上皮细胞变性、坏死，黏膜层腺体充血水肿，未见明显出血灶，余未见异常；小剂量组胃黏膜深层上皮细胞变性、坏死，未见明显出血灶，余未见异常。
　　(4)苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡大鼠胃组织中NF-κB、TNF-α蛋白表达的干预作用—免疫组织化学法和 Western-blotting法与空白对照组比较，运动模型组大鼠胃组织中NF-κB、TNF-α蛋白表达均有增多；与运动模型组相比较，苦苣总黄酮大剂量组大鼠胃组织中NF-κB、TNF-α蛋白表达显著减少，小剂量组大鼠胃组织中NF-κB、TNF-α蛋白表达减少，但不显著。
　　(5)苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡大鼠胃组织中NF-κB mRNA、TNF-αmRNA表达的干预作用—RT-PCR法与空白对照组比较，运动模型组大鼠胃组织中 NF-κB mRNA、TNF-αmRNA表达显著升高；与运动模型组比较，苦苣总黄酮大剂量组大鼠胃组织中 NF-κB mRNA、TNF-α mRNA表达显著减少，小剂量组大鼠胃组织中 NF-κB mRNA、TNF-αmRNA表达无明显变化。
　　(6)ELISA法测大鼠胃组织及血清中脑肠肽与脑钠素含量，与空白对照组比较，运动模型组脑肠肽和脑钠素含量均降低，两个剂量组的脑肠肽和脑钠素含量均有所上升，大剂量组含量上升明显。
　　结论：
　　1.苦苣总黄酮对大鼠运动应激性胃溃疡具有明显的预防作用。
　　2.1小时游泳运动且携带相当于大鼠2％体重的负荷建立的运动应激性胃溃疡模型较为理想。
　　3.在建立运动应激性胃溃疡模型时，雄性大鼠对运动应激更敏感，更容易出现运动应激性胃溃疡。
　　4.苦苣总黄酮具有一定的抗炎作用，能通过抑制细胞内炎症因子的表达，降低炎症反应对细胞的损伤。
　　5.苦苣总黄酮对脑肠肽和脑钠素具有一定的调节作用，保护胃黏膜。

目录

声明

符号说明

前言

第一部分 大鼠运动应激性胃溃疡模型的建立

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3统计学分析

实验结果

1. 不同负荷和不同游泳时间对大鼠胃黏膜损伤的影响

2. 不同性别对大鼠胃黏膜损伤的影响

3. 胃组织病理学结果

讨论

结论

第二部分 苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡的预防作用

材料与方法

1实验材料

2 实验方法

3统计学分析

实验结果

1.苦苣总黄酮对大鼠UI、胃黏膜SOD活性以及胃黏膜和血清MDA含量的影响

2.苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡干预作用的胃病理学改变结果

3.苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡大鼠胃组织中 NF-κB、TNF-a蛋白表达的影响—免疫组织化学法

4.苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡大鼠胃组织中 NF-κB、TNF-a表达的影响—Western-blotting法

5.苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡大鼠胃组织中 NF-κB、TNF-a表达影响—RT-PCR法

6苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡大鼠血清中BGP、BNP蛋白表达的影响—ELISA法

7.苦苣总黄酮对运动应激性胃溃疡大鼠胃组织中BGP、BNP蛋白表达的影响—ELISA法

讨论

结论

参考文献

综述：应激性胃黏膜损伤发生机制的研究进展

攻读硕士学位期间发表论文

致谢