卤虫（Artemia Shrimp）孵化酶的生物化学特性及孵化腺细胞的免疫细胞化学研究

摘要

卤虫孵化酶(HE)是由卤虫早期胚胎特异性分泌的、在孵化过程中起关键作用的一种蛋白酶.我们利用67﹪硫酸铵沉淀、DEAE-sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析和Sepharcy1凝胶过滤柱层析,并以酪蛋白为其蛋白酶水解活性的检测底物、以卵膜为其卵壳裂解活性的特异性底物,从卤虫胚胎孵化液中分离纯化出了卤虫的孵化酶分子,其在SDS-PAGE电泳中的分子量约为98.5kDa.免疫细胞化学染色结果显示,卤虫HGC最早出现于孵化前2h,于孵化后5h消失.卤虫胚胎的头部很可能是孵化酶的最早开始分泌的部位,可能也是主要的分泌部位,随着胚胎的继续孵出,身体背部继而腹部等部位也开始分泌孵化酶,以协助胚胎完全孵出.孵出后仍残留的孵化酶有可能参与了卤虫幼体内残余卵黄颗粒的消化降解,此结论还需进一步验证.

目录

本文所用缩写词

摘要

ABSTRACT

第一章动物孵化酶的研究进展

1.孵化酶的生物化学性质

1.1鱼类的孵化酶：

1.2两栖类的孵化酶：

1.3海胆的孵化酶：

1.4其它物种的孵化酶：

2.孵化酶基因的结构及其时空表达

2.1鱼类HE基因

2.2两栖类HE基因

2.3海胆HE基因

3.孵化酶对卵膜的作用

4孵化酶合成及分泌的影响因素

4.1缺氧引起的孵化酶的分泌

4.2温度对孵化酶分泌的影响

4.3光照对孵化酶分泌的影响

4.4激素对孵化酶分泌的影响

4.5其他影响因素

5孵化酶的研究价值及其应用前景

第二章卤虫孵化酶的分离纯化及其性质研究

1.实验用品

1.1实验材料：

1.2实验仪器：

1.3实验药品：

1.4常用溶液的配方：

2.实验方法：

2.1卤虫卵的人工孵化：

2.2孵化液的制备：

2.3卵膜的制备：

2.4孵化酶样品的酶活性分析：

2.5蛋白质的定量测定：

2.6孵化酶的纯化：

2.7 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：

2.8孵化酶生物化学性质的鉴定：

3.实验结果

3.1卤虫孵化酶的纯化：

3.2孵化酶的生物化学性质：

4.讨论：

5.结论

第三章卤虫(Artemia shrimp)孵化腺细胞免疫组织化学研究

1.实验用品

1.1实验材料：

1.2实验仪器：

1.3实验药品：

1.4常用溶液配方：

2.实验方法：

2.1卤虫卵的孵化

2.2胚胎的取材

2.3胚胎的固定

2.4梯度酒精脱水：

2.5透明、浸蜡与包埋：

2.6石蜡切片：

2.7酶标抗体染色：

3.实验结果：

3.1激活后发育后15小时的胚胎

3.2激活后发育23 h胚胎(E1期)：

3.3激活后发育25 h胚胎(E2.1期）

3.4激活后发育26 h胚胎(E2.2期)：

3.5激活后发育27 h胚胎(N-0期)：

3.6激活后发育28 h胚胎(N0.1期)：

3.7激活后发育29 h胚胎(N0.2期)：

3.8激活后发育32 h胚胎(N0.5期)：

4.讨论：

5.结论

参考文献

致谢