青岛文昌鱼体液与体表粘液中酚氧化酶生物化学性质的比较研究

摘要

酚氧化酶(Phenoloxidase，PO)，又称酪氨酸酶(Tyrosinase)是一种广泛存在于无脊椎动物与脊椎动物体内的含铜的酶，能够催化单酚羟化成二酚，并把二酚迅速氧化成醌，而醌在非酶促条件下自氧化生成反应终产物黑色素。酚氧化酶在无脊椎动物体内以酶原形式存在，广泛参与无脊椎动物的防御反应。 本文提取了青岛文昌鱼体液与体表粘液，并通过硫酸铵沉淀加以初步纯化，作为青岛文昌鱼体液与体表粘液中酚氧化酶的粗提物。本文利用多种生化手段初步研究了青岛文昌鱼体液与体表粘液中酚氧化酶的性质，并且首次对这两种不同组织来源的酶进行了初步的比较。 本文以L-DOPA为底物，研究了多种激活抑制因子对体液与体表粘液中酚氧化酶的作用，结果显示Ca2+、Mg2+、SDS、Trypsin、LPS、Zs能够同时显著提高两种来源的酶的活性，Zn2+轻微的提高酶活，Cu2+、PTU、STI、EDTA均能同时显著抑制两种来源的酶的活性，EGTA轻微抑制酶活，并且EDTA对两种酶活的抑制均可通过Ca2+的加入得到恢复，证明了在青岛文昌鱼体液与体表粘液中酚氧化酶均以酶原形式存在，并且具有相近的激活抑制行为。 本文比较了两种来源的酚氧化酶的最适底物、最适温度和最适pH值，结果显示青岛文昌鱼体液中最适底物为多巴胺，最适温度为35℃，最适pH为7.5；体表粘液中最适底物为多巴胺，最适温度为45℃，最适pH为9。结果证明了两种酚氧化酶均属酪氨酸酶型。

目录

文摘

英文文摘

1酚氧化酶研究概况

1.1酚氧化酶的发现与研究简史

1.2酚氧化酶的生物化学性质

1.3酚氧化酶的生理特性和功能研究

1.4酚氧化酶在无脊椎动物中的组织分布与定位

1.5酚氧化酶的分子生物学研究

2青岛文昌鱼体液与体表粘液中酚氧化酶活性的比较研究

2.1引言

2.2酚氧化酶粗提液的制备

2.2.1实验动物

2.2.2实验仪器和试剂

2.2.3文昌鱼体液的收集

2.2.4文昌鱼体表粘液的收集

2.2.5文昌鱼体液和体表粘液提取物的(NH4)2SO4沉淀

2.3酚氧化酶活性测定方法

2.3.1引论

2.3.2实验方法和数据处理

2.3.3实验结果

3部分二价阳离子与离子螯合剂对体液与体表粘液中酚氧化酶活性的影响

3.1引论

3.2 Ca2+浓度对体液与体表粘液中酚氧化酶活性的影响

3.2.1实验方法

3.2.2实验结果

3.3 Mg2+浓度对体液与体表粘液中酚氧化酶活性的影响

3.3.1实验方法

3.3.2实验结果

3.4 Zn2+浓度对体液与体表粘液中酚氧化酶活性的影响

3.4.1实验方法

3.4.2实验结果

3.5 Cu2+浓度对体液与体表粘液中酚氧化酶活性的影响

3.5.1实验方法

3.5.2实验结果

3.6离子螯合剂EDTA、EGTA对体液与体表粘液中酚氧化酶活性的影响及其Ca2+恢复

3.6.1 EDTA、EGTA对体液与体表粘液中酚氧化酶活性的影响

3.6.2体液与体表粘液经EDTA螯合后Ca2+回复对酚氧化酶活性的影响实验

3.6.3实验结果

3.7小结

4外源性激活剂对两种来源的酚氧化酶的活化作用比较

4.1引论

4.2胰蛋白酶(Trysin)对两种来源的酚氧化酶的活化作用比较

4.2.1实验试剂和方法

4.2.2实验结果

4.3阴离子去污剂SDS对两种来源的酚氧化酶的活化作用比较

4.3.1实验试剂和方法

4.2.2实验结果

4.4小结

5内源性激活剂对两种来源的酚氧化酶的活化作用比较

5.1引论

5.2大肠杆菌细胞壁提取物脂多糖(LPS)对两种来源的酚氧化酶的活化作用比较

5.2.1实验试剂和方法

5.2.2实验结果

5.3酵母多糖(Zs)对两种来源的酚氧化酶的活化作用比较

5.3.1实验试剂和方法

5.3.2实验结果

5.4小结

6常见酚氧化酶抑制剂对两种来源酚氧化酶的抑制作用比较

6.1引言

6.2苯硫脲(PTU)对两种来源酚氧化酶的抑制作用比较

6.2.1实验试剂与方法

6.2.2实验结果

6.3NaN3对两种来源酚氧化酶的抑制作用比较

6.3.1实验试剂与方法

6.3.2实验结果

6.4大豆胰蛋白酶抑制剂STI和p’-NPGB对两种来源酚氧化酶的抑制作用比较

6.4.1实验试剂与方法

6.4.2实验结果

6.5结论

7青岛文昌鱼体液与体表粘液中酚氧化酶的最适温度与最适PH值比较研究

7.1实验方法

7.2实验结果

8青岛文昌鱼体液与体表粘液中酚氧化酶的底物特异性比较研究

8.1引言

8.2实验试剂和方法

8.3实验结果

9结果与讨论

参考文献

致谢