声明
摘要
符号说明
前言
第一部分体外分离、鉴定肺癌A549干细胞样细胞
1．1实验材料
1．1．1实验细胞
1．1．2主要试剂及材料
1．1．3主要仪器设备
1．2实验方法及步骤
1．2．1主要试剂配制方法
1．2．2细胞培养方法
1．2．3悬浮细胞的培养
1．2．5 MTT检测无血清培养下A549细胞的增殖能力
1．2．6克隆实验检测无血清培养下A549细胞的增殖能力
1．2．7统计分析
1．3实验结果
1．3．1培养过程中A549细胞形态学变化
1．3．2普通培养与无血清条件培养A549细胞生长的差异
1．3．3无血清培养对CD133和ALDH1A1标记的肺癌A549干细胞样细胞比例的影响
1．3．4无血清培养对A549细胞增殖能力的影响
1．4小结
第二部分蝎毒抗癌多肽对肺癌A549干细胞样细胞影响的研究
2．1实验材料
2．1．1实验细胞
2．1．2实验药品
2．1．3主要试剂及材料
2．1．4主要仪器设备
2．2实验方法及步骤
2．2．1主要试剂配制方法
2．2．2实验分组
2．2．3 Notch1-mRNA表达水平的检测
2．2．4 MTT法检测肺癌A549干细胞样细胞的增殖能力
2．2．5克隆实验检测肺癌A549干细胞样细胞的增殖能力
2．2．6 PE Annexin V检测肺癌A549干细胞样细胞的凋亡
2．2．9 Western blotting法检测Notch1及其下游基因Hes-1蛋白、增殖凋亡相关基因蛋白、干性相关基因蛋白表达
2．3．0统计分析
2．3实验结果
2．3．1无血清培养对A549细胞中Notch1的影响
2．3．2不同浓度PESV对肺癌A549干细胞样细胞增殖的影响
2．3．3 PESV对肺癌A549干细胞样细胞中Notch1和Hes-1表达的影响
2．3．4 PESV对肺癌A549干细胞样细胞增殖、凋亡的影响
2．3．5 PESV对肺癌干细胞样细胞干性的影响
2．4小结
第三部分蝎毒抗癌多肽对荷瘤裸鼠肿瘤细胞影响的研究
3．1实验材料
3．1．1实验细胞
3．1．2实验药品
3．1．3主要仪器设备
3．2实验方法及步骤
3．2．1主要试剂配制方法
3．2．2实验分组
3．2．3荷瘤裸鼠模型的建立
3．2．4组织脱水、包埋处理
3．2．5免疫组化检测增殖相关基因PCNA蛋白表达
3．2．7 Notch1及其下游基因Hes-1蛋白、增殖凋亡相关基因蛋白、干性相关基因蛋白表达水平的检测
3．2．8统计分析
3．3实验结果
3．3．1 PESV对荷瘤裸鼠肿瘤的影响
3．3．2 PESV对荷瘤裸鼠肿瘤细胞干性的影响
3．4小结
讨论
结论
参考文献
致谢
附录
