肿瘤是严重威胁人类生命的常见病和多发病之一,全世界每年有1000多万新病例和600多万人死亡,其死亡率列居第二,仅次于心血管疾病。目前的研究已经证实,灵芝多糖肽具有明显的抗新生血管形成活性,对肿瘤细胞的生长也有着一定的抑制作用,并且相对于多糖,有着口服有效性,在抗肿瘤研究的将来有着十分广阔的前景。紫芝与赤芝同属,是我国的特有种类,国内外对它的研究报道甚少。 本研究项目在前期研究的基础之上,进一步完善灵芝抗肿瘤的研究。对紫芝菌株的深层发酵液配方进行了优化,通过单次单因素和正交实验,确定了其最佳深层液体发酵培养基组分为:(w／v):葡萄糖3.5％,蛋白胨0.3％,酵母粉0.1％,KH2PO40.1％,MgSO40.05％,维生素B10.005％；最适发酵培养条件为:28℃,160rpm／min,装液量150ml,培养14d后菌株生长状态最好,菌丝体产率可达6.7g／L。对发酵液上清进行脱除游离蛋白的处理,分别采用两种方法,不同浓度的TCA和(NH4)2SO4盐析结果显示,蛋白质的洗脱率和多糖的损失率均与TCA和(NH4)2SO4浓度呈正相关。10％的TCA浓度时蛋白洗脱率达到70％以上,SDS-PAGE电泳结果也间接地证实了这一点。但同时,多糖的损失率也随着蛋白洗脱率的增加而增加；PAS染色能看到很明显的红色条带,说明多糖损失较多,超过25％。而90％浓度的(NH4)2SO4能够洗掉绝大部分的蛋白,并且控制多糖损失在20％以内。有利于接下来的分离纯化步骤。发酵上清液经过90％浓度的(NH4)2SO4盐析,透析脱盐,进行DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,得到单一糖峰和单一蛋白峰,并且糖峰和蛋白峰高度重合,收集重合峰,获得了纯化的胞外多糖蛋白复合物(EP1)。此复合物具有较高的抗自由基活性及抗肿瘤作用。
展开▼
