养殖池塘中降解氨氮有益微生物的分离与鉴定

摘要

本实验在6月到10月期间采集日照和东营两个虾蟹养殖区四种不同的养殖模式池塘中的水样和底泥并分离样品中的细菌,筛选降解氨氮效果良好的菌株,对不同月份分离的菌株进行统计;通过16SrDNA对所筛选到的菌株进行序列分析,确定菌株的种类;结合菌株对氨氮和亚硝酸盐降解率和菌种类型挑选出两种不同类型的细菌,并将其分别添加到凡纳滨对虾的养殖环境中,验证了两株细菌对凡纳滨对虾的安全性。主要研究结果如下:
　　1.养殖池塘中氨氮降解微生物的分离和筛选
　　采用直接分离和富集培养分离法,从日照和东营4种不同虾蟹养殖模式的池塘中分离多株亚硝化细菌和硝化细菌。采用直接分离共从6月日照的样品中分离纯化到66株细菌,通过筛选得到20株可高效降解亚硝酸盐的硝化细菌,14株高效降解氨氮的亚硝化细菌;采用富集培养分离法,从所有不同月份的样品中分离筛选出233株亚硝化细菌和201株硝化细菌,经过筛选培养基筛选最终得到66株对亚硝酸盐具有较高降解能力而且效果稳定的菌株,降解率中最高的可达到100％;13株对氨氮具有较高降解能力而且效果稳定的菌株,降解最高的达到了83.63%。对分离菌株数量进行统计,结果表明6、7、8三个月份分离得到的菌株数量较多。通过比较两种不同分离方式分离的菌株,富集培养法较直接分离法具有一定的优势。
　　2.养殖池塘中氨氮降解微生物的鉴定
　　对上一章中所筛选到的所有具有高降解能力的菌株进行鉴定。16SrDNA序列分析表明,鉴定的菌株中与标准菌株Marinobacter spp.(18株)和Pseudoalteromonas spp.(21株)相似度在97%以上,这两类细菌的丰度最高;与Vibrio spp.相似性在99%以上的菌株次之(7株),其次为Halomonas spp.(4株),Marinomonas spp.(3株),Desemzia incerta(1株),Exiguobacterium aurantiacum(1株),Alteromonas spp.(1株),Thalassospira spp.(1株),Sphingomonas spp.(1株),菌株的相似性均在99%以上。综合菌株的类型、降解率和分离源,挑选两株细菌(菌株7RO29和菌株8DH26),结合形态观察、生理生化指标测定以及16S rDNA序列分析等方法对两株菌进行分类学鉴定,结果表明该两株菌分别为盐单胞菌(Halomonas sp.)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。
　　3.分离的微生物对凡纳滨对虾的安全性检验
　　为检验菌株7RO29和菌株8DH26的安全性,实验选取凡纳滨对虾作为实验材料,将两株菌的菌液加入到对虾养殖环境中,使水体中的菌液浓度分别达到104 cfu/ml、106 cfu/ml、108cfu/ml,结果显示两株菌分别在108 cfu/ml和106cfu/ml浓度以下实验组与对照组中对虾的累计死亡情况无明显差异,证明该两株细菌可以使用在生产上。

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0 引言

第一章文献综述

1 对虾养殖业发展状况

2 养殖水环境中氨氮的来源与循环机制

3 有益微生物在水产养殖中的应用

4 本研究的目的与意义

第二章 养殖池塘中降解氨氮微生物分离与筛选前言

1 材料与方法

2 实验结果

3讨论

第三章 养殖池塘中降解氨氮微生物的鉴定前言

1材料与方法

2实验结果

3讨论

第四章 分离的微生物对凡纳滨对虾的安全性检验前言

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

结论

参考文献

附件

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