经前舒颗粒对PMS肝气郁证模型大鼠不同脑区雌激素受体表达的影响

摘要

目的：制备经前期综合征（premenstrual syndrome，PMS）肝气郁证大鼠模型，研究该模型的评价指标；检测不同脑区内雌激素受体的表达，探讨PMS肝气郁证发病的微观机制，并探究中药复方制剂经前舒颗粒对PMS肝气郁证的干预作用。 方法：采用束缚法、居住-入侵法制备PMS肝气郁证大鼠模型，以调肝方药经前舒颗粒进行药物干预。采用细胞涂片法观察大鼠阴道细胞形态，确定动情周期：接收期与非接收期。以旷场实验和悬尾实验两种行为学方法评价模型。造模后，将各组大鼠断头处死，迅速取出额叶皮层、海马、下丘脑、边缘叶这四个脑区。提取脑组织的总蛋白。用蛋白质印迹技术（western blot，WB）检测各脑区雌激素受体α与β（ERα、ERβ）两种受体在不同脑区的表达水平。 结果：与空白组相比，居住-入侵造模组（居住组）及居住-入侵造模给药组（居住给药组）大鼠体重变化显著（P<0．05，P<0．01）。行为学检测表明：在接收期，与空白组大鼠相比，束缚组和居住组大鼠悬尾不动时间显著增加（P<0．01）；而与两造模组相比，相应的两造模给药组大鼠悬尾不动时间均显著减少（P<0．01）。在非接受期，与空白组大鼠相比，束缚组和居住组大鼠旷场实验的水平得分、垂直得分及总分均显著减少，但悬尾不动时间显著增加（P<0．01）；与两造模组相比，相应的两造模给药组大鼠旷场水平得分、垂直得分及总分均显著增加，但悬尾不动时间均显著减少（P<0．01）。蛋白印迹实验表明，与空白组大鼠相比，束缚组大鼠额叶皮层、海马、下丘脑、边缘叶ERα表达显著升高（P<0．01）；居住组大鼠边缘叶与下丘脑ERα表达显著升高（P<0．01），皮层表达量亦显著升高（P<0．05）；束缚组与居住组各指标均无显著性差异；与模型组比较，给药组各脑区的ERα表达水平不同程度的降低。与空白组大鼠相比，束缚组大鼠额叶大脑皮层、海马、下丘脑、边缘叶ERβ表达显著升高（P<0．01）；居住组大鼠皮层与海马ERβ表达显著升高（P<0．01），在下丘脑、边缘叶的表达亦升高（P<0．05）；束缚组与居住组各指标均无差异；与模型组比较，给药组各脑区的ERβ表达水平不同程度的降低。 结论：用居住-入侵法可有效制备PMS肝气郁证大鼠模型，旷场实验可有效评价该模型，悬尾实验不适宜用来评价PMS肝气郁证大鼠模型。大鼠不同脑区的ERα与ERβ表达与PMS肝气郁证关系密切，额叶皮层、海马、下丘脑、边缘叶中的ERα与ERβ表达变化可能是导致PMS肝气郁证的重要病因之一。中药经前舒颗粒对该病证模型大鼠有不同程度的调节作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

材料与方法

1实验材料

1.1药品与试剂

1.2实验仪器

1.3实验动物

1.4溶液配制

2实验步骤及方法

2.1大鼠模型制备

2.2雌激素受体表达的检测

2.3统计方法

结果

1行为学测试结果

1.1各组大鼠体重称量结果

1.2各组大鼠旷场及悬尾得分

2雌激素受体表达检测结果

2.1免疫印迹法检测图

2.2免疫印迹法测定雌激素受体表达量

讨论

1情绪与PMS的关系

1.1情绪与情志

1.2情绪与PMS

2情志病证动物模型制备与评价

2.1情志病证动物模型研究现状

2.2居住-入侵法制备PMS肝气郁证动物模型

2.3肝气郁证大鼠模型动情周期的确定

2.4造模时间与环境

2.5动物模型的评价

2.6旷场实验结果分析

2.7悬尾实验结果分析

2.8体重测量结果分析

3雌激素受体与PMS的关系

3.1与情绪关系密切的脑区

3.2雌激素受体两个亚型与情绪关系

3.3 5-羟色胺对雌激素受体的介导作用

3.4雌激素受体与γ-氨基丁酸的关系

4问题与展望

结语

参考文献

综述:雌激素受体研究进展

致谢

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