广西地不容生物碱高速逆流色谱制备技术及提取工艺研究

摘要

广西地不容为防己科(Menispermaceace)千金藤属(S tephania)植物,生石山上,分布于广西西北部至西南部及云南等地。本植物含有大量的生物碱类化合物,是提取颅痛定等镇痛类生物碱药物的主要药物资源。今年来,由于人为地乱采乱伐和其生长区域的限制,广西地不容的蕴藏量在逐年下降。虽然有人工栽培技术已经开始应用于广西地不容种植,但是其提供的产量仍满足不了需求,出现了药材的掺假现象及混用现象。本研究以广西地不容为研究对象,对其生物碱类化合物进行了分离、鉴定及提取工艺进行了研究,为其资源的进一步开发和利用及质量控制提供了依据。本研究主要展开了一下几方面的研究工作。1.文献整理根据研究的目的,进行了与地不容有关的文献整理,对地不容进了本草学考证及植物资源的分布、化学成分研究、药理作用研究、质量评价方法进行了总结。2.结晶法结合pH区带逆流色谱法分离制备广西地不容中主要生物碱-青风藤碱。广西地不容药材粉末用95％的乙醇回流提取,过滤、浓缩至干浸膏。浸膏用pH值为3～4的酸水溶解后,过滤得酸水液。滤液用氨水调pH值至9～10,用氯仿萃取得总生物碱,将总生物碱溶解成甲醇的饱和溶液,静置2d,析出青风藤碱粗品。用pH区带逆流色谱法可分离得到高纯度的青风藤碱。3. pH区带高速逆流色谱法结合常规高速逆流色谱法分离广西地不容中生物碱采用常规高速逆流色谱法结合pH区带逆流色谱法对地广西地不容的生物碱成分进行了研究。首先用pH区带逆流色谱法对其含量低的生物碱进行了富集,高含量生物碱进行了分离。富集后的生物碱经常规逆流色谱法分离。共得到4种单体化合物,运用核磁共振(NMR)、质谱(MS)及物理化学性质对所得成分进行结构鉴定,四种化合物分别为青风藤碱、克班宁、罗默碱和千金藤碱。4.提取工艺研究采用闪式提取器对广西地不容中的生物碱类成分进行了提取,并优化了提取条件,提取条件包括提取时间、溶剂比例和乙醇浓度。以分离得到的四种主要生物碱即,青风藤碱、克班宁、罗默碱和千金藤碱为标准品,经高效液相色谱(HPLC)对不同提取条件的广西地不容中生物碱的提取量进行了测定,最终确定了最佳提取条件。闪式提取法提取广西地不容中的生物碱具有高效,快速的优点,可用于广西地不容中生物碱成分的提取及分离。

目录

提要

Abstract

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引言

第一部分 地不容类植物研究概况

1 本草学考证及原植物资源

1.1 本草考证

1.2 植物形态

1.3 生活环境及分布

1.4 地不容的显微特点

2. 化学成分研究

3 药理作用研究

3.1 肌肉松弛作用

3.2 杀虫活性

3.3 镇静和安定作用

3.4 抗炎、镇痛作用

3.5 将压作用

3.6 抗心律失常作用

3.7 细胞毒活性

3.8 抑菌和抗病毒活性

4. 生物碱提取工艺及质量评价研究

5. 种质资源研究

第二部分 pH 区带精制逆流色谱法制备青风藤碱

1 实验部分

1.1 仪器与设备

1.2 原料与试剂

1.3 青风藤碱粗品的制备

1.4 pH 区带精制逆流色谱分离纯化青风藤碱

1.5 高效液相色谱条件

2 结果与讨论

2.1 高效液相色谱条件的选择

2.2 pH 区带逆流色谱溶剂系统的选择

2.3 青风藤碱的结构鉴定

3 结论

第三部分 pH 区带精制逆流色谱法结合常规逆流色谱法分离制备广西地不容中的生物碱

1. 试验

1.1 试剂与材料

1.2 仪器

1.3 样品的提取

1.4 两相溶剂系统的配制和样品的溶解

1.5 高速逆流色谱分离过程

1.6 高效液相色谱法分析总生物碱和逆流色谱流出组分

2. 结果与讨论

2.1 高效液相色谱条件的选择

2.2 pH 区带逆流色谱条件的优化

2.3 常规逆流色谱溶剂系统的选择

3. 化合物的鉴定

4. 结论

第四部分 闪式提取法提取广西地不容生物碱的工艺研究

1 仪器与试药

2. 试验与方法

2.1 标准品溶液的制备

2.2 广西地不容生物碱的提取

2.3 色谱条件

2.4 线性关系考察

2.5 精密度试验

2.6 稳定性试验

2.7 重复性试验

2.8 回收率

2.9 样品的测定

3 结果与讨论

3.1 高效液相色谱条件的选择

3.2 闪式提取条件的优化

4. 小结

参考文献

第四部分 本研究的创新点

第五部分 结语

附录

致谢