高原鼢鼠和高原鼠兔脑组织中foxp2基因的表达和定位

摘要

高原鼢鼠(Myospalax baileyi)终生营地下洞道生活,是一种地下哺乳动物;高原鼠兔(Ochotona curzoniac)分布于青藏高原,是一种地面哺乳动物。叉头框蛋白P2(FOXP2)是一种与口面部协调、运动协调功能有关,并且与学习记忆、以及回声定位功能有密切联系的转录因子,在对高原鼢鼠长期的野外观察中发现高原鼢鼠具有很强的学习记忆能力,并且能够准确的在洞道内定位。为了研究和探讨foxP2基因与高原鼢鼠发达的学习记忆能力之间的关系,克隆了高原鼢鼠foxP2基因的编码区序列;应用荧光定量PCR测定两种动物脑组织中foxP2 mRNA的表达水平;应用Western blot测定两种动物脑组织中FOXP2蛋白的表达水平;应用免疫组织化学方法检测FOXP2蛋白在高原鼢鼠脑组织中不同区域的表达。结果显示:(1)高原鼢鼠foxP2编码区序列相对保守,但其编码的氨基酸序列显示高原鼢鼠存在两个特殊的氨基酸突变;(2)高原鼢鼠foxP2的表达量极显著高于高原鼠兔(P<0.01);(3)高原鼢鼠FOXP2的表达量极显著高于高原鼠兔(P<0.01);(4)FOXP2蛋白在高原鼢鼠脑组织不同区域均有表达,其中以大脑皮层、丘脑和纹状体区域表达量较高。另外,在对高原鼢鼠的野外观察中还发现其能够准确的记忆挖掘过的洞道并且能够在其洞道中进行准确定位。通过对这些结果的分析,认为高原鼢鼠发达的学习记忆能力与foxp2基因在高原鼢鼠脑组织中的高表达有着密切的联系。

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第一章 引言

1.1地下鼠对洞道生活的适应

1.2地下鼠的空间定位方式

1.3地下鼠空间定位的机理

1.4 Foxp2基因的发现及其功能

第二章 实验方法

2.1 实验动物

2.2高原鼢鼠foxp2基因克隆

2.3 脑组织foxp2 mRNA荧光定量PCR (Real-time PCR)测定

2.4 FOXP2蛋白表达纯化

2.5 FOXP2多克隆抗体制备

2.6 FOXP2蛋白质表达量的测定

2.7 FOXP2蛋白在高原鼢鼠脑组织中分布的检测

2.8 统计方法

第三章 实验结果

3.1 高原鼢鼠foxp2 cDNA序列及分析

3.2 高原鼢鼠FOXP2氨基酸序列及分析

3.3 荧光定量PCR检测foxp2表达水平

3.4 高原鼢鼠FOXP2蛋白纯化

3.5 FOXP2特异性抗体制备及 ELISA检测抗体效价

3.6 Western blot检测FOXP2表达水平

3.7免疫组织化学方法检测高原鼢鼠脑组织FOXP2表达区域

第四章 讨 论

第五章 全文总结

参考文献

致谢

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