牦牛脑组织线粒体腺苷酸转运体基因克隆及表达研究

摘要

为探索脑组织线粒体中腺苷酸转运体（Adenosine Transporter，ANT）是否与低氧环境存在相关性，本研究将青藏高原土著动物—牦牛作为研究对象，以高原习服黄牛为对照，运用分子生物学技术，测定了与牦牛ANT3、ANT4表达相关的两种基因（SLC25A6、SLC25A31）的CDS序列，对CDS序列、ANT3及ANT4进行了生物信息学分析。同时，对牦牛及高原习服黄牛脑组织不同部位SLC25A6 mRNA、SLC25A31 mRNA进行实时荧光定量分析。进一步利用Western Blot及免疫组织化学方法，测定牦牛及高原习服黄牛脑组织中ANT3、ANT4的表达及分布情况。研究结果如下：
　　（1）牦牛脑组织SLC25A6 CDS序列、SLC25A31 CDS序列与黄牛具有很高的相似性，在进化过程中十分保守。牦牛脑组织ANT3与ANT4活性位点及功能结构域与黄牛无差异。
　　（2）SLC25A6 mRNA、SLC25A31 mRNA在牦牛与高原习服黄牛脑组织间的表达量存在显著差异：牦牛端脑及小脑SLC25A6 mRNA表达量显著高于高原习服黄牛；牦牛小脑SLC25A31 mRNA表达量显著高于高原习服黄牛，而端脑SLC25A31 mRNA表达量低于高原习服黄牛。
　　（3）ANT3、ANT4均能够在牦牛与高原习服黄牛脑组织中表达；在牦牛脑组织中以枕叶表达量最高，端脑表达量均值高于小脑。
　　（4）ANT3、ANT4在端脑及小脑中的分布不同。ANT3与ANT4在端脑中主要分布于各层的神经细胞中，而在胶质细胞中未见分布；ANT3在小脑中主要分布于分子层神经细胞及髓质胶质细胞中，少量分布于颗粒层神经细胞中，在浦肯野细胞层中无分布；而ANT4在小脑中主要分布于皮质的分子层神经细胞、颗粒层神经细胞及浦肯野细胞层中。
　　研究结果表明，在低氧环境中，牦牛腺苷酸转运体通过转录水平及翻译水平的调控来实现能量代谢的调节作用，而并非转录前基因CDS序列结构的变化所引起。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

缩略词表

第1章 引言

1.1青藏高原自然环境基本特点

1.2牦牛对低氧环境的适应

1.3非土著动物高原习服现象

1.4青藏高原低氧环境对脑组织能量代谢的影响

1.5线粒体研究进展

1.6溶质载体家族-25在线粒体中发挥的作用

1.7腺苷酸转运体的结构功能

1.8本文研究目的、意义

第2章 牦牛脑组织SLC25A6基因、SLC25A31基因克隆

2.1本章引论

2.2实验材料与方法

2.3实验结果

2.4讨论

2.5本章小结

第3章 Real-time PCR检测牦牛脑组织SLC25A6 mRNA及

3.1本章引论

3.2实验材料与方法

3.3实验结果

3.4讨论

3.5本章小结

第4章 Western blot测定ANT3、ANT4蛋白表达情况

4.1本章引论

4.2实验材料与方法

4.3实验结果

4.4讨论

4.5本章小结

第5章 免疫组化法分析ANT3、ANT4在牦牛脑组织细胞中的分布情况

5.1本章引论

5.2实验材料与方法

5.3实验结果

5.4讨论

5.5本章小结

第6章 全文总结

参考文献

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果