海星皂甙的分离纯化及其对果蝇生长发育的影响

摘要

海星因为以海参、鲍鱼等海洋珍贵软体动物为食一直以来被视为影响海洋养殖业的有害动物，近些年来，国内外关于海星中活性成分的提取及其活性研究越来越多，尤其是海星皂甙的研究，但是关于其抑制昆虫生长发育的研究一直以来都是个空白。我国沿海的海星资源丰富，但一直以来的研究都无法使海星被人们大批量的利用，研究一种海星的生物活性使其可以大量的被开发利用应该引起人们更多的关注。本文主要研究了以下几个方面。
　　首先，将整体冻干的罗氏海盘车粉碎机粉碎后用改进的甲醇提取法进行浸提，先用甲醇浸提，再用水饱和的正丁醇进行提取，最终得到海星总皂甙，利用香草醛-硫酸检测法及其溶血活性对提取出的总皂甙进行初步鉴定。然后用甲醇复溶提取物后中压柱层析分离，最终得到了10个组分，其中F-2所得到的峰面积最大，对这十个组分进行高效液相色谱的分析，F-2组分的峰型最好，对F-2进行进一步分离纯化后得到较纯的一种化合物F-2B。
　　其次，对化合物F-2利用高效液相色谱-质谱联用等方法进行结构解析。
　　最后，对提取出的海星皂甙的活性进行研究。研究海星皂甙对果蝇生长发育的影响。用提取出的100μg/mL、50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL的海星皂甙溶液以及对照组、100μg/mL的毛地黄皂甙溶液组、DMSO组配制果蝇培养基对同种条件果蝇进行饲养，研究其子代果蝇的蛹化和羽化情况。实验证明，与对照组相比，海星皂甙对果蝇子代的蛹化和羽化都有一定的抑制作用，其抑制活性随培养基中皂甙的浓度增加而增大，而DMSO组则没有抑制活性。其中100μg/ml在第七天的蛹化最大抑制率为48.9％，在第九天的羽化抑制率为68.75％，显示出比较高的抑制活性，而毛地黄皂甙的第七天蛹化抑制率为21.2％，第九天羽化抑制率为31.25％。
　　另外，利用MTT法检测500μg/mL、350μg/mL、250μg/mL、125μg/mL的海星总皂甙和毛地黄皂甙标准品对HepG2肝癌细胞的增殖抑制作用，结果表明，海星总皂甙和毛地黄皂甙对细胞都有比较高的抑制活性，并且随着标准品和样品浓度的增加，其抑制活性也增加，在终浓度500μg/mL浓度下对细胞有较大的抑制能力，抑制率分别为:49.89％和60.48％，而丝裂霉素的抑制率为63.55％。
　　本论文中提取出的海星总皂甙对果蝇的蛹化和羽化都有比较高的抑制活性，若在此基础上，进一步研究其抑制机理，并对其化学及其生理上进行研究，有望开发出一种新型的生物活性物质，可作为一种潜在的天然昆虫杀虫剂，同时，根据近些年的研究成果，亦可能开发成为一种新型的天然药物。这不仅可以解决昆虫杀虫剂抗性的问题，防止化学杀虫剂对环境的污染，更可以使海洋有害动物海星变害为宝。

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中文摘要

英文摘要

第一章 综 述

1海星类化学成分的研究概况

第二章 海星皂甙的提取、分离、纯化

1实验材料

2 实验仪器和试剂

3实验方法和步骤：

第三章 海星皂甙的结构鉴定

1 实验材料

2实验仪器和试剂

3 实验方法与步骤

4 实验结果

第四章 海星皂甙的活性研究

1海星皂甙抑制果蝇生长发育活性的研究

2 海星皂甙抗肿瘤活性检测

5 小结

讨 论

1 海星皂甙的提取，分离和纯化

2 海星皂甙的结构解析

3 海星皂甙溶血实验分析

4海星总皂甙的果蝇生长抑制活性分析

5 海星皂甙对体外肝癌细胞HepG2细胞抑制作用结果分析

结 论

参考文献

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