液体样品解吸附电喷雾电离质谱分析在蛋白质组学中的应用

摘要

此论文主要介绍了一种快速,新型的方法来提高蛋白肽在混合物中的离子化效率。这种新方法是通过盐酸酸化样品,从而来抑制磷酸肽的磷酸基团去质子化效应,然后通过液体样品解吸附电喷雾电离质谱检测方法(DESI-MS)来对此进行分析。这个对分析物直接离子化的方法几乎不需要样品预处理。 磷酸化作用是最常见的蛋白质翻译后修饰的一种。它在生物进程中起着重要的作用,例如信号传导。通过质谱在正离子模式下来分析磷酸蛋白的一个重大挑战就是在磷酸蛋白通过酶降解之后,对这个复杂的混合物(其中包含大量的非磷酸肽)进行电离,通过传统的质谱检测方法,电喷雾电离(ESI)方法,磷酸肽的信号被严重的抑制。此论文介绍了这种样品通过盐酸酸化后通过解吸附电喷雾电离质谱检测来解决这个问题。盐酸加入到样品中,抑制了磷酸基的去质子化,从而达到了提高电离效率的作用。由于样品的强酸性,容易对仪器引起腐蚀伤害,所以传统的电喷雾电离方法(例如:ESI)是不适用于此方法的,但是DESI-MS方法对低pH值的样品有很好的适应性,由于它的稀释作用。酪蛋白(Casein)和卵清蛋白(ovalbumin)的降解产物作为这个方法检测的样品。酪蛋白(Casein)和卵清蛋白(ovalbumin)经过酶的降解之后用传统的电喷雾电离方法(ESSI,ESI的一种变体形式)来检测,所有的磷酸肽都有不同程度的抑制作用。但是通过DESI-MS检测方法检测,都可以清楚的检测到,例如+3价磷酸肽EMEAEpSIpSpSpSEEIVPNpSVEQK。此外,对于β-casein降解实验,+2价多磷酸基的肽链RELEELNVPGEIVEpSLpSpSpSEESITR的信号强度得到了提高,而且,对于+3价离子也成功的检测到,这对电子捕获分离(electron-capture dissociation(ECD))检测提供了很有效的序列信息。这种新方法是一种高灵敏度(例如:Casein样品的质谱谱图只需要5pmol的样品用量),而且此方法非常快速,离解前不需要层析分离技术。这种方法也适用于硫酸肽的分析,在蛋白质组学分析中有很重要的作用。

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第一章简 介

1.1 目标

1.2 综述

1.3 解吸附电喷雾电离质谱（DESI-MS）

第二章

2.1 引言

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

第三章

3.1 简介

3.2 实验部分

3.3 结果与讨论

第四章 总结和未来的工作

参考文献

缩写词目录

作者在博士期间发表的学术论文和专利情况

致谢