海人酸致痫大鼠中神经肽Ghrelin与Nesfatin-1表达变化及其意义研究

摘要

目的：建立海人酸癫痫动物模型，观察神经肽Ghrelin与Nesfatin-1在海人酸致痫大鼠癫痫发作后不同时期未治疗与治疗过程中的变化特征，初步探讨其表达意义，以期在癫痫诊治和疗效评估中建立更为便捷、敏感的方法，为更深入的研究癫痫发病机制提供理论依据。
　　方法：雄性SD大鼠96只，随机分为空白对照组（不给予干预措施）、假手术对照组（注入等量生理盐水）、致痫后生理盐水灌胃组（NS组）和致痫后丙戊酸镁灌胃组（VPA组），后两组又各分为3h、6h、12h、24h、3d、7d、14d七个时点亚组，每组均6只。致痫组在立体定向操作下向大鼠脑内杏仁核局部注射海人酸1.0μl，建立癫痫动物模型，观察致痫大鼠的行为学和脑电图改变。处死大鼠后，应用HE染色、Nissl染色等技术检测其病理学变化，放射免疫分析法（RIA）、酶联接免疫吸附法（ELISA）和免疫组化方法检测血清和下丘脑中Ghrelin、Nesfatin-1表达水平。
　　结果：1.利用精确的立体定向方法将海人酸注射到84只致痫组大鼠的杏仁核建立癫痫动物模型，诱发出癫痫的大鼠82只，成功率为97.62％。通过HE染色和Nissl染色可见致痫大鼠神经元形态学改变：发作急性期神经元细胞排列不整齐，星形细胞明显水肿、变性；发作静止期神经元几乎完全缺失，胶质疤痕形成；发作慢性期神经元已经消失，出现神经元吞噬现象。
　　2.KA致痫大鼠血清Ghrelin和Nesfatin-1的动态变化：RIA检测结果显示空白对照组和假手术对照组间无统计学差异(p>0.05)；而与对照组相比，NS组和VPA组各时点血清中Ghrelin的表达水平均降低(p<0.05)，以NS组的降低更为明显；VPA组与NS组相比较，VPA组各相应时点血清中的Ghrelin表达水平都显著高于NS组(p<0.05)，但仍然低于对照组水平。ELISA检测结果显示空白对照组和假手术对照组间无统计学差异(p>0.05)；而与对照组相比，NS组和VPA组各时点血清中Nesfatin-1的表达水平均升高(p<0.05)，以NS组的升高更为明显；VPA组与NS组相比较，VPA组各相应时点血清中的Nesfatin-1表达水平都显著低于NS组(p<0.05)，但仍然高于对照组水平。
　　3.KA致痫大鼠下丘脑Ghrelin和Nesfatin-1的动态变化：免疫组化结果显示：空白对照组和假手术对照组间无统计学差异(p>0.05)。与对照组相比，NS组和VPA组各时点下丘脑中Ghrelin的表达水平均降低(p<0.05)，VPA组与NS组相比较，VPA组各相应时点下丘脑中Ghrelin的表达水平都有所升高，尤其是在药物灌胃后的24h、7d和14d有统计学意义(p<0.05)，但仍然低于对照组水平；NS组和VPA组各时点下丘脑中Nesfatin-1的表达水平均升高(p<0.05)，VPA组与NS组相比较，VPA组各相应时点下丘脑中的Nesfatin-1表达水平都有所降低，并且在药物灌胃后的各个时点都有统计学意义(p<0.05)，但仍然高于对照组水平。
　　结论：1.立体定向操作下在脑内局部显微注射海人酸，可以成功建立致痫模型，且明显降低实验成本。
　　2.血清辛酰基化Ghrelin和Nesfatin-1可以反映下丘脑中相应神经肽的变化趋势。
　　3.抗痫药物治疗前、后神经肽Ghrelin和Nesfatin-1存在显著性变化，准确地检测血清辛酰基化Ghrelin和Nesfatin-1水平，可能会为癫痫疾病的诊治和疗效评估中提供一个更为简捷、敏感的无创性候选指标。

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前 言

材料与方法

1.致痫模型的制作

2. 致痫大鼠的行为学观察和脑电图监测

3. 大鼠灌注采集标本

4. 放射免疫方法（RIA）检测血清Ghrelin含量

5. 酶联免疫吸附方法（ELISA）检测血清Nesfatin-1含量

6. 石蜡切片制作

7. 石蜡切片海马区HE染色

8. 石蜡切片海马区Nissl染色

9. 免疫组化方法测定下丘脑Ghrelin和Nesfatin-1

10. 统计学处理

结 果

1. 实验一般情况

2. KA致痫大鼠行为学改变：

3. KA致痫大鼠脑电图改变：

4. KA致痫大鼠神经元形态学改变：

5. KA致痫大鼠血清Ghrelin和Nesfatin-1的动态变化

6. KA致痫大鼠下丘脑Ghrelin和Nesfatin-1的动态变化

讨 论

结 论

图 表

参考文献

文 献 综 述

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

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