苹果种质资源玻璃化法超低温保存技术及其遗传变异分析

摘要

植物材料在超低温保存过程中,其物质代谢、能量代谢及其它生命活动降至最低限.因而,超低温保存是长期和稳定保存植物种质的有效方法之一.玻璃化超低温保存技术具有操作简单、程序简化及保存效果好等优点,越来越成为超低温保存的主要方法.该试验以离体培养的苹果茎尖作为材料,对玻璃化方法冻存的主要步骤包括继代培养、低温锻炼、预培养、玻璃化冰冻保护剂脱水、冷冻保存、化冻洗涤及再培养进行了优化,筛选了合适的冰冻保护剂PVS3,得到了70﹪以上的茎尖成活率,并通过对再生苗形态、生化及分子水平的遗传稳定性检测,证明了该方法保存苹果种质资源的可行性.

目录

文摘

英文缩略写

前言

1材料与方法

1.1试验材料

1.2试剂

1.3实验方法

1.3.1低温锻炼

1.3.2预培养

1.3.3玻璃化保护剂处理及冻存

1.3.4材料化冻

1.3.5恢复培养

1.3.6 TTC法测细胞活力

1.3.7成活率和相对成活率的计算方法

1.3.8水分测定方法

1.3.9可溶性糖测定方法

1.3.10可溶性蛋白质电泳

1.3.11同工酶电泳及染色

1.3.12 DNA提取及RAPD分析

1.3.13琼脂糖电泳

1.4数据分析

2结果与分析

2.1继代培养时间长短对成活率的影响

2.2低温锻炼对成活率的影响

2.3预培养对成活率及茎尖含水量和含糖量的影响

2.3.1蔗糖浓度及预培养时间对成活率的影响

2.3.2蔗糖与甘露醇配合使用及预培养时间对成活率的影响

2.3.3 NH4+和DMSO对成活率的影响

2.3.4预培养过程中茎尖含水量和含糖量的变化

2.3.5预培养对冻存后细胞活力的影响

2.4冰冻保护剂对成活率的影响

2.4.1冰冻保护剂及处理时间的筛选

2.4.2不同处理方式对成活率的影响

2.4.3茎尖大小对PVS3耐受力的差异

2.5液氮中保存时间对成活率的

2.6不同的化冻方法对成活率的影响

2.7不同恢复培养方式对成活率的影响

2.7.1恢复培养基的选择

2.7.2 NH4+和茎尖长度对生长迟滞期的影响

2.7.3恢复生长的动态变化

2.8不同苹果品种成活率差异的比较

2.9冻存成活苗的生长发育情况

2.10超低温保存后叶片的再生能力

2.11蛋白质变异检测

2.12 POD同工酶变异检测

2.13 RAPD方法检测遗传变异

3讨论

3.1前处理提高成活率的问题

3.2玻璃化保护剂

3.3生长迟滞期的问题

3.4超低温保存后再生途径对遗传稳定性的影响

3.5再生植株遗传稳定性检测

3.6进一步研究的设想

4结论

参考文献

致谢

在学期间发表及待发表的文章