枸杞多糖对海马神经干细胞损伤的保护作用及对海马神经干细胞增殖分化作用的研究

摘要

文章从以下两部分就枸杞多糖对海马神经干细胞损伤的保护作用及对海马神经干细胞增殖分化作用的研究进行了综述。
　　第一部分：氯化甲基汞慢性暴露对新生鼠学习记忆的影响及枸杞多糖干预的实验研究
　　目的：探讨环境污染物氯化甲基汞（methylmercury chloride，MMC）低剂量慢性暴露对新生鼠学习记忆和海马神经干细胞(neural stem cell，NSCs)的损伤作用以及枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharide，LBPs）对其毒性损伤的早期干预作用，为寻找机体抵抗环境污染物氯化甲基汞的新途径提供实验依据。方法：（1）选雄性SD新生鼠60只，随机分为对照组、模型组、干预组。模型组和干预组颈部皮下注射MMC（4 mg/kg·d），共注射28天。对照组颈部注射相同剂量的生理盐水。干预组哺乳式喂养 LBP(2 g/kg·d)。设3、6、9周三个时间窗，行为学检测采用Morris水迷宫测定新生鼠逃避潜伏期、跨台次数，免疫荧光染色观察新生鼠海马齿状回内新生神经元的数量和形态变化。（2）分离、培养和鉴定胚胎鼠海马NSCs，用MTT法检测不同浓度MMC(100 pmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L)处理后海马神经干细胞的存活水平，以分析MMC对海马 NSCs的毒性作用程度；然后分别用适合浓度的MMC和LBPs处理海马神经干细胞，采用免疫荧光法观察海马 NSCs的增殖、分化及神经元突起发育的形态。结果：(1)与对照组相比，模型组逃避潜伏期延长，跨台次数明显较对照组少，干预组的逃逸潜伏期和垮台次数较对照组没有明显变化，但干预组较模型组有明显缩短，垮台次数明显增多，干预组海马齿状回 DCX阳性神经元和对照组相比没有明显变化，模型组和对照组相比，海马齿状回DCX阳性神经元减少，LBPs干预组海马齿状回DCX阳性神经元和模型组相比较，其阳性神经元数目明显增加，并呈时间依赖性递增。(2) MMC处理海马NSCs细胞存活率呈浓度依赖性递减，海马神经干细胞在浓度100 nmol/L以上环境中均死亡，在加入LBPs后，海马NSCs存活率显著提高，分化为神经元的数目增多，突起增长。
　　结论：(1) MMC低剂量慢性暴露可直接导致新生鼠空间学习记忆的损伤，可能与海马齿状回DCX阳性神经元减少有关；(2) MMC对海马神经干细胞有较强的神经毒性作用，并与MMC浓度呈剂量正相关性；(3) LBPs对MMC所造成的海马NSCs损伤作用具有一定的保护作用，可为神经退行性疾病的早期预防与治疗提供新的理论依据和途径。
　　第二部分：枸杞多糖对海马神经干细胞向神经元分化的研究
　　目的：观察分析切割海马伞（去神经支配）海马提取液联合枸杞多糖在神经干细胞向神经元分化中的作用。方法：取胚16天龄的SD大鼠的海马组织，分离培养得到海马神经干细胞。5-6天后，将纯化的海马神经干细胞球制备成单细胞悬液，接种于24孔培养板中。随机分为空白对照组（DMEM/F12培养基）、去神经海马提取液组（在DMEM/F12培养基中加入去神经海马提取液）、枸杞多糖组（在DMEM/F12培养基中加入枸杞多糖）、联合组（在 DMEM/F12培养基中加入去神经海马提取液和枸杞多糖）。分化培养10天后，利用免疫荧光染色法检测各组海马神经干细胞向 MAP-2/NeuN阳性神经元分化情况，利用统计学分析各组中海马神经干细胞向神经元分化的情况。结果：各组和空白对照组相比较，海马干细胞分化后的MAP-2阳性神经元分化率及神经元周长都有显著差异。空白对照组神经元分化率为4.579±0.2926％(n=10），神经元平均周长为644.1±38.25μm(n=100)；去神经海马提取液组神经元分化率为9.133±0.2835％(n=10)，神经元平均周长为：1163±42.30μm(n=100)；枸杞多糖组神经元分化率为7.919±0.1827％(=10)，神经元平均周长为：1057±31.15μm(n=100)；联合组神经元分化率为11.29±1.008％(n=10)，神经元平均周长为1547±47.25μm(n=100)；其中，联合组的神经元比例最高，神经元的周长最长。结论：去神经海马提取液联合枸杞多糖可以更好地促进海马神经干细胞向神经元分化，并促进神经元的生长。

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第一部分：氯化甲基汞慢性暴露对新生鼠学习记忆的影响及枸杞多糖干预的实验研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

第二部分：枸杞多糖促进海马神经干细胞向神经元分化

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附 图

综述综述一：氯化甲基汞的生物毒性作用

1 氯化甲基汞理化特性

2 氯化甲基汞对人体的毒性作用

3 氯化甲基汞毒性作用的机制

综述二：枸杞多糖的医学研究进展

1 抗氧化及抗衰老

2 免疫调节

3 降血糖调节血脂

4、抗肿瘤作用

5、神经保护作用

[展望]

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文