苹果砧木品种BADH基因遗传转化的研究

摘要

苹果是世界上最重要的水果之一.苹果常规育种工作由于童期长、遗传背景复杂而效率较低,而植物生物技术的发展为苹果育种开辟了一条新的途径.随着现代分子生物技术的飞速发展,克隆、鉴定目的基因、将目的基因转化到植物中并获得转基因工程植株,使植物育种取得了突破性进展.该实验首先建立了苹果砧木罗6和珠美海棠的高效稳定的再生体系,研究了各个影响因子对再生频率的影响,找出最佳的组合条件,得到了较高的再生频率,为BADH基因的转入打下了良好的基础.通过农杆菌介导法将BADH基因导入叶片中,研究转化过程中的各个影响因子,优化了农杆菌介导的苹果基因转化条件,得出了最佳组合条件,得到了抗性植株.

目录

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符号说明

1引言

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1植物材料及试验地点

2.1.2植物激素

2.1.3菌株

2.2试验方法

2.2.1再生体系的建立

2.2.2农杆菌介导的BADH基因转化苹果砧木实验

2.2.3转化频率的统计

2.2.4转化植株的鉴定

3结果与分析

3.1苹果砧木高效再生体系的建立

3.1.1叶片再生不定芽的生长过程

3.1.2植物生长调节剂对叶片再生的影响

3.1.3基本培养基对再生的影响

3.1.4黑暗处理以及操作方式对叶片再生的影响

3.1.5基因型对再生的影响

3.1.6叶片的不同生理状态对再生的影响

3.1.7生根培养基的筛选

3.2农杆菌介导的超强表达BADH基因转化苹果

3.2.1农杆菌介导的遗传转化的一般过程

3.2.2抗生素的敏感度实验

3.2.3农杆菌侵染时间对遗传转化的影响

3.2.4预培养时间对转化的影响

3.2.5共培养时间对转化的影响

3.2.6乙酰丁香酮(AS)对转化的影响

3.2.7抽真空的处理对转化的影响

3.2.8材料的侵染方式对转化的影响

3.2.9材料侵染时的切割方式对转化的影响

3.2.10根癌农杆菌介导的超强表达BADH基因转化苹果

3.3转化植株的分子生物学检测

4讨论

4.1植物基因转移对受体系统的要求

4.2影响苹果离体叶片直接再生不定芽的因素

4.2.1影响苹果叶片再生的内在因素

4.2.2影响苹果叶片再生的外在因素

4.3遗传转化的因素分析

5结论

5.1建立了苹果叶片高效稳定的再生体系

5.2农杆菌介导的苹果遗传转化

5.3根癌农杆菌介导的超强表达BADH基因转化苹果法

6参考文献

7附表

8附图

致谢

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