山东省桑萎缩、枣疯病、竹丛枝及三种新植原体病害分子检测与鉴定

摘要

本论文主要对山东省桑萎缩、枣疯病及竹丛枝植原体进行了分子检测与鉴定，并初步检测与鉴定了苋菜、黄荆和马褂木三种植物植原体新病害。 采集山东泰安表现黄化型萎缩病桑树材料，通过PCR扩增16SrRNA基因、延伸因子基因(tuf)及核糖体蛋白基因(rp)，分别得到大小约为1.4kb、0.8kb和1.2kb的目的片段并进行了序列测定。对16SrRNA基因、延伸因子基因和核糖体蛋白基因的核苷酸序列利用pDRAW32软件进行RFLP分析并构建系统发育树，确定了该植原体在三个基因水平的亚组分类地位，分别为属于16SrI-B、tufI-B和rpI-B亚组。 采集山东省十一个不同地区疑似枣疯病的病害样品，PCR检测结果表明所采集样品内有植原体存在，通过分析16SrRNA基因和rp基因的核苷酸序列，明确了山东省枣疯病植原体属于16SrV-B亚组。并对泰安的枣疯病材料进行电镜观察，检测到了植原体菌体的存在。 从山东济南、日照和泰安分别采集得到了表现丛枝症状的竹子材料，克隆了其16SrRNA基因，进行核苷酸序列比对和RFLP分析。引起山东省竹丛枝的植原体属于翠菊黄化组的16SrI-B亚组，与国内已经报道的竹丛枝属于同一个组，进一步证明了与竹丛枝病相关的植原体株系分布的广泛性。 分别提取表现褪绿的苋菜、叶片黄化的马褂木和表现黄化的黄荆三种植物组织的总DNA，进行直接PCR或nested-PCR检测，从这三种植物材料均扩增得到了植原体的16SrRNA基因，并进一步从表现褪绿症状的苋菜组织中扩增得到了植原体的rp基因。序列同源性分析和RFLP分析发现，与苋菜褪绿病相关的植原体属于翠菊黄化组的16SrI-B，rpI-B亚组；与马褂木黄化病相关的植原体属于翠菊黄化组植原体16SrI-B亚组；与黄荆黄化病相关的植原体属于榆树黄化组(16SrV)。

目录

文摘

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论文说明：英文缩略表

声明

一 引言和文献综述

引言

1植原体概述

1.1植原体的发现

1.2植原体的基本形态和超微结构

1.3植原体的分类

1.4植原体的基因组研究

1.5植原体的检测和鉴定研究

2桑萎缩病研究现状

2.1桑树黄化型萎缩病病症研究

2.2桑黄化型萎缩病病原研究

2.3桑树黄化型萎缩病病原检测

2.4桑树黄化型萎缩病病原的分类

2.5问题与展望

3枣疯病研究现状

3.1枣疯病的症状及危害

3.2枣疯病植原体病原研究

3.3枣疯病病原检测和分类

3.4问题与展望

4与竹丛枝病相关的植原体研究现状

4.1与竹丛枝病相关的植原体的发生和危害

4.2与竹丛枝病相关的植原体病原研究

4.3与竹丛枝病相关的植原体的分类现状

5本研究的内容和目的意义

5.1本研究的主要内容

5.2本研究的主要意义

二 研究材料与方法

1实验材料

1.1植物材料来源

1.2菌株和载体

1.3生化及分子生物学试剂

1.4主要实验仪器

1.5实验常规试剂及配制

2实验方法

2.1总DNA提取

2.2植原体16S rRNA基因的PCR扩增

2.3植原体tuf基因的PCR扩增

2.4植原体rp基因的PCR扩增

2.5植原体PCR产物的克隆及测序

2.6序列分析

2.7电子显微镜观察实验

三 结果与分析

1桑黄化型萎缩病植原体的分子检测与鉴定

1.1桑萎缩病症状表现及危害调查

1.2 PCR扩增结果

1.3基因序列测定及比较分析

2山东省枣疯病植原体调查及分子检测与鉴定

2.1枣疯病调查及危害症状

2.2 16S rRNA基因序列分析

2.3rp基因序列分析

2.4枣疯病植原体电镜观察结果

3山东省竹丛枝病的调查及分子检测和鉴定

3.1竹丛枝症状表现

3.2 16S rRNA基因序列分析

3.3竹丛枝植原体的16S rRNA基因的RFLP分析

4三种新的植物植原体病害的初步检测与鉴定

4.1感病植物症状表现

4.2基因序列分析及RFLP分析

4.3与黄荆黄化病相关的植原体电镜观察结果

四讨论

1关于桑黄化型萎缩病植原体

2关于枣疯病植原体

3关于与竹丛枝病相关的植原体

4关于三种新植物植原体病害

5展望

参考文献

致谢

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