鸡致病性大肠杆菌的药敏试验、血清型鉴定及耐药基因的PCR检测

摘要

2006年9月，从山东省某肉鸡集团的五个商品鸡场，采集了疑似大肠杆菌病、死鸡的肝脏、心脏等样品76份。经过细菌分离培养后，并经染色镜检、生化试验、致病性试验等鉴定均为致病性大肠杆菌。按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的判定标准，对分离得到的76株大肠杆菌进行对24种常用抗生素及其他抗生素药物的药敏试验，结果表明76株均表现出不同的程度的耐药性，耐药范围较广，其中，耐药程度最高的是青霉素和氨苄西林，其次是复合磺胺、环丙氟哌酸、四环素、利福平、万古霉素、苯唑青霉素、红霉素，这9种药物对76株大肠杆菌低敏或耐药率达到100.0％，接下来依次为氟哌酸，氯霉素，呋喃妥因，链霉素，卡那霉素，庆大霉素，丁胺卡那霉素，头孢他啶，头孢噻肟，头孢呋新，敏感度最高的仅有头孢哌酮、头孢唑啉、头孢三嗪三种药物。 血清型的测定由扬州大学高崧博士协助完成，结果在分离得到的76株大肠杆菌中，除各种原因未能定型外，共鉴定出25株分离株的O血清型O41，O78，O29，O76，O5，O14，O104和O63，检测结果表明O41，O78，O29血清型为该肉鸡集团的优势血清型，占定型菌株的68.0％。另外，各分场的血清型存有较大差异，而且同一鸡场存有多个不同的血清型。针对此种情况需要各场根据自己的优势血清型的菌株做自家苗进行预防以有效的控制大肠杆菌的发生。 从分离得到的76株致病性大肠杆菌筛选出耐氨苄西林和四环素的菌株，针对β-内酰胺和四环素耐药基因分别设计2对特异性引物，对耐药菌株进行PCR检测，结果表明TEM基因阳性45株，占60.0％，CTX-M基因阳性35株，占33.3％，且TEM和CTX-M基因均为阳性高达23.5％；tetA基因阳性15株，占22.1％，tetD基因阳性23株，占33.8％；β-内酰胺类和四环素类交叉耐药的阳性菌株也占38.2％。此外，耐药基因测序结果分析表明这4种耐药基因与Genbank中的相关基因的同源性均高于99.3％，且对应的氨基酸未发生改变，反映了大肠杆菌的耐药特性并没有发生改变。这说明大肠杆菌耐药性耐药谱广，耐药水平高，多重耐药和交叉耐药也相当普遍，而且耐药特性稳定不易发生改变。

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声明

第一部分文献综述

1大肠杆菌的研究进展

1.1大肠杆菌的分离鉴定

1.2抗原结构

1.3菌毛、性菌毛和纤维样蛋白结构

2大肠杆菌血清型的研究进展

3大肠杆菌抗药性研究进展

4大肠杆菌耐药机制研究进展

4.1抗生素作用位点改变或新作用位点产生

4.2酶对抗生素的修饰和破坏

4.3减少抗生素向大肠杆菌内的摄入

4.4增加抗生素从大肠杆菌向细胞外的主动排出作用

第二部分研究内容

一、鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

1材料与方法

2结果

3.讨论

二、鸡致病性大肠杆菌耐药基因的检测

1材料

2方法

3结果

4讨论

结论

参考文献

致谢