氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤的新生大鼠海马神经细胞的保护作用及机制研究

摘要

目的：观察氧化槐定碱（Oxysophoridine，OSR）对原代培养的新生大鼠海马神经细胞缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用，并初步探讨 OSR对原代培养的新生大鼠海马神经细胞缺糖缺氧再灌注损伤的保护作用的可能机制。
　　方法：1.以原代培养的新生大鼠海马神经细胞为研究对象，用无糖培养液结合物理性缺氧建立缺糖缺氧再灌注损伤模型。
　　2.MTT法测定神经细胞存活率、化学比色法测定神经细胞乳酸脱氢酶（ LDH）漏出率以及激光共聚焦技术测定神经细胞内线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential，MMP）水平的变化。
　　3.化学比色法测定神经细胞培养液中谷氨酸（Glu）的含量。Western blot方法和实时荧光定量PCR技术检测大鼠海马神经细胞NMDA受体NR1亚基蛋白和mRNA的表达。激光共聚焦技术测定神经细胞内游离钙离子浓度（[Ca2+]i）的变化。化学比色法测定神经细胞内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）水平的变化。
　　结果：1.与正常组相比，缺糖缺氧再灌注损伤模型组可显著降低神经细胞的存活率（P＜0.01），提高乳酸脱氢酶的漏出率（P＜0.01），降低神经细胞内线粒体膜电位的荧光比值（P＜0.01）。
　　2.与模型组相比，氧化槐定碱治疗组（20、5、1.25mg/L）可显著提高大鼠海马神经细胞的存活率（P＜0.01），降低乳酸脱氢酶的漏出率（P＜0.05，0.01）。氧化槐定碱治疗组（20、5mg/L）与模型组相比，可明显提高神经细胞内线粒体膜电位的荧光比值（P＜0.05，0.01）。
　　3.与模型组相比，氧化槐定碱治疗组（20、5、1.25mg/L）可以减少神经细胞培养液中谷氨酸的含量（P＜0.05，0.01）。氧化槐定碱治疗组（20mg/L）与模型组相比，可明显抑制NMDA受体NR1亚基蛋白和mRNA的表达（P＜0.05，0.01）。
　　4.与模型组相比，氧化槐定碱治疗组（20、5、1.25mg/L）可减少神经细胞内游离Ca2+浓度（P＜0.05，0.01）。
　　5.氧化槐定碱治疗组（20、5、1.25mg/L）与模型组相比，可明显降低神经细胞内MDA的含量，提高神经细胞内SOD的活性（P＜0.05，0.01）。与模型组相比，氧化槐定碱治疗组（20、5mg/L）可明显提高神经细胞内GSH-Px和CAT的活性（P＜0.01）。氧化槐定碱治疗组（20、5mg/L）与模型组相比，可显著降低神经细胞内NO含量（P＜0.05，0.01）。与模型组相比，氧化槐定碱治疗组（20、5、1.25mg/L）可显著降低神经细胞内NOS的活性（P＜0.05，0.01）。
　　结论：1.氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤的大鼠海马神经细胞具有保护作用。
　　2.氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤的大鼠海马神经细胞的保护作用机制可能与抑制兴奋性氨基酸毒性，从而减轻兴奋性氨基酸毒性所致的细胞内钙超载和氧化应激损伤有关。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

前 言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结 果

1 大鼠海马神经细胞的体外原代培养

2 大鼠海马神经细胞免疫荧光鉴定

3 体外模拟缺糖缺氧再灌注损伤模型的建立

4 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经细胞培养液中谷氨酸（Glu）含量的影响

6 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经细胞 NMDA 受体 NR1 亚基mRNA表达的影响

7 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经细胞内Ca2+浓度的影响

7 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经细胞内MDA含量和SOD活性的影响

8 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经细胞内GSH-Px和 CAT 活性的影响

9 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经细胞内NO含量和NOS活性的影响

讨 论

1 新生24h大鼠海马神经细胞的原代培养及其鉴定

2 新生24h大鼠海马神经细胞的鉴定

3 离体缺糖缺氧再灌注损伤模型的建立

4 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤的神经细胞的保护作用

5 氧化槐定碱对缺糖缺氧再灌注损伤的神经细胞的保护作用的可能机制

文献综述兴奋性氨基酸毒性在脑缺血损伤中的研究进展

1、兴奋性氨基酸概述

2、脑缺血时的EAA

3 谷氨酸兴奋性神经毒的分子机制

4 自由基促进兴奋性氨基酸的产生

5 关于EAA介导的脑保护方法评价

6 结论