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符号说明
1 前言
1.1 东平湖概况
1.1.1 东平湖地理位置
1.1.2 东平湖水文概况
1.2 湖泊微生物多样性研究进展
1.2.1 微生物多样性涵义
1.2.2 湖泊微生物多样性
1.3 微生物多样性研究方法
1.3.1 传统方法
1.3.2 分子生物学方法
1.3.3 环境样品基因组DNA的提取与纯化
1.3.4 16S rRNA的结构及性质
1.3.5 聚合酶链式反应(PCR)
1.3.6 基于PCR技术的研究方法
1.4 选题依据
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 采样位点
2.1.2 采样时间
2.1.3 样品编号
2.2 试剂、仪器设备
2.2.1 主要仪器设备
2.2.2 生化试剂
2.2.3 PCR引物
2.2.4 分析软件
2.3 实验方法
2.3.1 样品采集
2.3.2 湖水理化性质分析
2.3.3 吖啶橙染色直接计数法(AODC)分析
2.3.4 湖水样品DNA的提取与纯化
2.3.5 T-FFLP分析
2.3.6 16S rRNA基因文库的构建与分析
2.3.7 DGGE分析
3 结果与分析
3.1 湖水理化性质
3.2 AODC
3.3 湖水微生物总DNA提取
3.4 T-RFLP分析
3.4.1 用于T-RFLP的PCR扩增
3.4.2 T-RFLP图谱
3.4.3 样品的多样性比较
3.5 16S rRNA基因文库的构建
3.5.1 用于16S rRNA基因文库构建的PCR扩增
3.5.2 细菌16S rRNA克隆文库构建
3.5.3 细菌16S rRNA扩增片段的限制性酶切分析
3.5.4 测序结果分析
3.5.5 浮游细菌群落的丰度和物种均度
3.5.6 系统发育分析
3.6 DGGE
3.6.1 DGGE图谱分析
3.6.2 Quanity One软件分析
3.7 相关性分析
4 讨论
4.1 微生物多样性时间性差异
4.2 微生物多样性空间性差异
4.3 各类微生物的分析
4.4 分子生物学方法之间的比较
4.5 几点建议
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况